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黄瓜GST基因转化拟南芥及其对高温抗性的提升机制探究

一、引言

1.1研究背景与意义

在全球气候变暖的大背景下，极端高温天气的出现愈发频繁，这对植物的生长发育造成了严重威胁。植物在生长过程中对温度有着严格的要求，一旦温度超出其适宜范围，尤其是遭遇高温胁迫时，植物的生理生化过程、生长发育进程以及最终的产量和品质都会受到显著影响。高温胁迫会导致植物气孔关闭，阻碍二氧化碳的进入，进而使光合作用下降，影响植物的物质生产和能量积累；还会干扰植物体内的水分平衡，导致干物质生产减少，呼吸作用异常，矿物质代谢紊乱，激素平衡失调以及抗氧化系统功能改变等。这些变化严重影响了植物的生长发育和繁殖能力，最终导致农作物产量降低、品质变差，给农业生产带来巨大损失。例如，在2022年夏天，我国多地经历了持续近两个月的高温，长江沿岸多座城市的气温超过了高温阈值或历史极值，许多农作物因高温胁迫而大幅减产。因此，提高植物的抗高温能力，增强其对高温环境的适应性，已成为植物科学研究领域的重要课题，对于保障农业生产的稳定和可持续发展具有至关重要的意义。

谷胱甘肽-S-转移酶（GlutathioneS-Transferase，GST）是一类在所有植物体内都广泛存在的功能酶，大多数以可溶性二聚体酶的形式分布于植物体的各个组织。植物体内还原型谷胱甘肽（GSH）的醇基部位能够与某些内源或外源有害物质的脂溶性分子的亲电子中心相偶联，将其催化转化为高水溶性、低毒的产物，从而在植物应对各种胁迫的过程中发挥着关键作用。黄瓜GST基因作为GST基因家族的重要成员，在黄瓜应对逆境胁迫时，其表达和酶活力会发生显著变化，展现出对逆境的响应和适应机制。研究表明，在高温胁迫下，黄瓜GST基因表达及酶活力显著上调，这暗示着黄瓜GST基因在植物抗高温过程中可能扮演着重要角色。

拟南芥作为一种模式植物，具有生长周期短、基因组小、易于遗传操作等优点，其基因转化技术已经广泛应用于植物基因工程研究中。将黄瓜GST基因转化到拟南芥中，通过对转基因拟南芥的研究，可以深入探究黄瓜GST基因在植物抗高温过程中的作用机制，为进一步揭示植物抗高温的分子机制提供理论依据。同时，这也为利用基因工程技术培育耐高温的植物新品种提供了新的思路和方法，具有重要的实践意义。通过将黄瓜GST基因导入其他重要农作物中，有望增强这些农作物的抗高温能力，减少高温胁迫对它们的伤害，从而提高农作物的产量和品质，保障全球粮食安全。因此，开展黄瓜GST基因对拟南芥的转化及转基因植株抗高温能力的研究具有重要的理论和现实意义。

1.2国内外研究现状

在植物抗高温机制的研究方面，国内外学者已经取得了一定的成果。在基因转录层面，热胁迫相关的转录因子，如热激反应因子（HSFs）和热休克蛋白（HSPs）的功能和作用机制已逐步被揭示。研究发现，高温胁迫会诱导这些转录因子的表达，它们通过调控下游基因的表达，参与植物的热胁迫响应过程。例如，HSFs能够结合到热休克蛋白基因的启动子区域，促进其表达，从而帮助植物抵御高温胁迫。高温胁迫还会诱导应激颗粒的形成，这些颗粒通过选择性地招募mRNA和蛋白质，发挥存储、降解、保护或隔离的功能，在植物应对高温胁迫中起到重要作用。

关于小分子RNA在植物抗高温中的作用也有不少研究。华东师范大学生命科学学院晏军课题组发现，微小RNA（miRNA）能对植物的抗热性起到关键调控作用。他们的研究揭示了miR165/166模块通过调控热应激核心因子HSFA1来帮助植物应对高温的分子机制。在高温胁迫下，虽然加工复合体关键蛋白HYL1的总量减少，但其在细胞核内的定位增加，从而更有效地结合miRNA前体，促进成熟miRNA的产生，进而调节植物的耐热性。

在GST基因的研究领域，国内外学者对其在植物生长发育和逆境胁迫响应中的作用进行了广泛研究。已知GST基因家族在植物中广泛存在，可分为phi、tau和zeta三类，其中phi和tau类成员在植物中最为广泛。phi类成员在各种植物组织中均有表达，tau类成员在叶绿体中也有表达。GST基因家族成员的分子质量基本在20-30kDa之间，属于低分子量酶，其表达的多样性以及对胁迫的响应的多样性，表明它们在植物的适应性进化中起着至关重要的作用。已有研究表明，GST基因参与了植物对多种逆境胁迫的响应，包括重金属、致癌物、杀虫剂以及干旱、盐碱等非生物胁迫。在高温胁迫下，部分植物的GST基因表达和酶活力会发生变化，但其具体的作用机制尚未完全明确。

在拟南芥转基因研究方面，目前已经建立了多种高效的遗传转化方法，如农杆菌介导法、花粉管通道法等。这些方法为将外源基因导入拟南芥提供了技术支持，使