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工程（一）的结构和工程的基本工具

编稿：闫敏敏审稿：

【学习目标】

1、了解工程的诞生及概念。

2、知道的结构。

3、简述重组技术所需三种基本工具及其应用（重点、难点）。

【要点梳理】

要点一、工程概述

工程的别名拼接技术或重组技术

操作环境生物体外

操作对象

操作水平分子水平

操作过程剪切→拼接→导入→表达

结果人类需要的产物

拼接的理论基础①是生物的主要遗传物质；

②的基本组成单位都是四种脱氧核苷酸；

③双链分子的空间结构都是规则的双螺旋结构。

外源在受体内表①是控制生物性状的独立遗位；

②遗传信息的传递都遵循法则；

达的理论基础③生物界公用一套遗传子。

要点二、工程的诞生

1.遗传基础理论的重大突破

、赫尔希、等人证明是遗传物质

1953年，和克里克提出双螺旋结构

1958年，梅塞尔森和斯塔尔证明的半保留

1963~1967年，尼伦伯格、霍拉纳破译遗传

法则的提出和完善遗传信息在大分子间的传递

2.技术发明使工程的实施成为可能

技术上三明：

⑴转移载体的发现——1967年，T.F.Roth（）D.R.Helinski（海）发现质粒的自我能力，

并能够在细菌之间转移。

⑵工具酶的发现——1972年，H.C.Smith、W.ArberD.Nathans从流感杆菌中分离得到限制性内切酶；

1970年，逆转录酶的发现使真核细胞的成为可能；此后，多种限制酶和连接酶被发现。

⑶体外重组的实现—1972年，Berg第一次构建出了体外重组分子。

重组表达实验的成功—1973年，H.BoyerS.Cohen选用仅含单一EcoRI酶切位点的载体质粒pSC101，使

之与非洲爪蟾核糖体蛋白的片段重组。重组的转入大肠杆菌中，转录出相应的mRNA。

3.技术进一步推动工程的发展：

⑴第一例动物和植物问世

1980年，科学家通过显微注射培育出世界第一个小鼠。

1983年，科学家采用农杆菌转化法，培育出世界上第一例烟草。

⑵PCR技术的发明

1988年，美K.Mullis发明PCR技术，使工程进一步发展。

三、的结构

1.原核细胞结构

2.真核细胞结构

四、工程的工具

1.“分子的手术刀”——限制性内切酶（限制酶）

（1）存在：主要存在于原核生物中。

（2）特点：一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，并且在特定的切点上切割分子。它具有专一性，

表现在两个方面

①识别双链中特定的核苷酸序列。

②切割特定序列中的特定位点，特定序列表现为对称，如EcoRI酶的切割序列（如下图）。

（3）作用部位：限制酶切割分子时被断开的是链中的磷酸二酯键（连接相邻脱氧核苷酸的键）：而不

是碱基间的氢键，如下图所示：

（4）结果：切割形成的片段产生两种末端，如下图所示：

要点诠释：

在生物体内有一类酶，它们能将外来的切断，但对自己的没有损害作用。由于这种切割作用是在

分子进行的，故名限制性内切酶，简称限制酶。限制酶是工程中重要的切割工具，科学家已经从原核

生物中分离出了许多种限制酶并且已经商品化，在工程中广泛使用。

2.“分子的缝合针”——连接酶

（1）种类：根据连接酶的不同，可分为两类：