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基于分子克隆技术的2个miniSTR基因座等位基因分型标准物制备与遗传多态性分析

一、引言

1.1研究背景与意义

短串联重复序列（ShortTandemRepeats，STR），作为第二代遗传学标记，广泛存在于人类基因组中，具有长度多态性，其核心单位由2-6个碱基组成，并以串联重复的方式排列，重复次数的变化构成了STR的遗传多态性。由于STR分布广泛、数目众多，约占人类基因组的10%，包含丰富的遗传信息，使其成为目前法医学个人识别和亲子鉴定中应用最为广泛的遗传标记。传统的STR分型技术在法医物证鉴定等领域发挥了重要作用，然而，在面对一些特殊检材，如古DNA、高度降解DNA或痕量DNA时，传统STR技术存在一定的局限性。例如，在一些重大刑事案件、突发性事件和群体灾难事故中，法医检案工作常面临DNA高度降解的检材或低拷贝模板DNA，由于PCR抑制剂的存在和DNA模板降解为小片段，使用传统商品化的多色荧光标记STR复合扩增试剂盒进行检测，经常会出现“优势扩增”或者“无效扩增”的情况，导致DNA降解检材的分型成功率较低，制约了某些重要物证在案件侦破中的作用。

为了解决这些问题，MiniSTR技术应运而生。MiniSTR是一种较短的短串重复序列，通常由10至60个碱基对组成。通过重新设计引物，使其更接近核心重复序列，使得PCR扩增产物比传统STR分型更短。这一技术优势使得MiniSTR在分析劣质DNA样本时表现出色，具有更好的灵敏度和更高的分辨率。首先，由于扩增产物短，MiniSTR更适合分析古DNA、高热分解DNA、痕量DNA等难以处理的样本，能够从这些复杂样本中获取有效的遗传信息。其次，MiniSTR的变异率更高，对个体之间的差异更敏感，从而能够提供更精确的遗传分析结果。此外，MiniSTR技术对于分析古老、笼统的人类残骸和犯罪样本也具有重要意义，即使是崩解和污染的DNA样本，MiniSTR也能够检测到其中的基因多态性。

在MiniSTR技术的应用中，等位基因分型标准物起着至关重要的作用。等位基因分型标准物是人群中常见的等位基因混合物，用于与未知样品比对以确定基因型。在以PCR为基础的STR多态性分析技术中，为了准确命名各基因座的等位基因，需要一个可靠的比对标准物。早期采用片段长度bp值方法与已知分子量标准物同步电泳并比较来命名STR的等位基因，但这种方法存在严重缺陷。因为DNA在介质中的电泳迁移率不仅与其分子量有关，还受自身序列结构的影响，相同分子量的DNA片段和分子量标准在同一介质电泳时会出现不同迁移率的条带，导致无法准确进行STR分型。而等位基因分型标准物的出现解决了这一问题，它保证了对应STR基因座的等位基因正确命名。国际法医血液遗传学会（ISFH）在1994年和1997年对等位基因提出了命名原则，并对其应用提出具体要求，即等位基因分型标准物中的所有等位基因应按规则进行测序和命名，且应涵盖所有常见的等位基因，并尽可能拥有罕见的等位基因，以便获得未知样品准确的基因型。

本研究致力于制备2个MiniSTR基因座等位基因分型标准物，并对其遗传多态性进行研究，具有重要的理论和实际意义。在理论方面，通过对这2个MiniSTR基因座等位基因分型标准物的研究，能够深入了解MiniSTR基因座的遗传特性和多态性分布规律，为人类遗传多样性研究提供重要的数据支持，有助于进一步揭示人类群体的遗传结构和演化历史。在实际应用中，所制备的等位基因分型标准物可应用于法医学领域，提高DNA分型的准确性和可靠性，为案件侦破、亲子鉴定等提供有力的技术支持。同时，对于古人类学研究，MiniSTR技术和等位基因分型标准物的结合，能够更有效地分析古代人类遗骸的遗传信息，为人类进化和迁徙研究提供新的线索。此外，在其他涉及个体识别和遗传分析的领域，如疾病诊断、动植物遗传学研究等，本研究的成果也可能具有潜在的应用价值。

1.2国内外研究现状

在MiniSTR基因座研究方面，国外起步较早。自MiniSTR技术概念提出以来，众多研究致力于挖掘和开发新的MiniSTR基因座。例如，一些研究团队通过对人类基因组数据库的深入分析，结合实验验证，发现了多个具有高多态性和良好扩增特性的MiniSTR基因座。这些研究不仅丰富了MiniSTR基因座资源，还为后续的遗传分析提供了更多选择。在国内，相关研究也逐渐兴起。科研人员针对中国不同民族和地区人群的特点，开展了MiniSTR基因座的筛选和评估工作。通过大规模的样本采