油菜高频农杆菌介导转化优化条件研究.pdfVIP

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油菜（BrassicanapusL.）

VinithaCardoza和C.NealStewart,Jr.

通过优化外植体的预处理时间和与农杆菌的共培养时间，可以在油菜中获得

高频的农杆菌介导的转化。72小时的预处理时间和48小时的共培养时间协同增加

了转化效率至25%。此外，通过克服过度水化，可以促进植物的恢复，使

生根频率提高到100%。

：油菜；农杆菌；共培养；预处理；外植体；转化；生根。

1.引言

1.1.提高农杆菌介导的转化效率

根瘤农杆菌介导的转化仍然是大多数物种植物生产的选择，

因为其成本效益高、操作简便且效率高。持续的研究提高了根瘤农杆菌

介导的转化效率。新型高致病性菌株的发展极提高了转化效率，并

促进了许多难转化物种的转化(1)。此外，使用根瘤农杆菌进行转化的效

率可以通过在共培养步骤之前将外植体预置于愈伤组织诱导培养基上来

增强(2–6)。当植物组织受伤时，它们会向周围介质中分泌vir诱导化合物

(7)。受伤的组织也处于活跃的代谢状态。这些因伤口引起的细胞而

产生的活跃细胞比裂细胞更容易被转化(8)。新合成的细胞壁对

于根瘤农杆菌在转化前的高效附着是必需的(9)。根瘤农杆菌的毒力根瘤

农杆菌

：分子生物学方法，第343卷：农杆菌协议，第二版，第一卷编辑：KanWang©Humana

PressInc.,Totowa,NJ

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Canola(BrassicanapusL.)

VinithaCardozaandC.NealStewart,Jr.

Summary

High-frequencyAgrobacteriumtumefaciens-mediatedtransformationcanbeobtained

incanolabyoptimizingthepreconditioningtimeoftheexntandcocultivationtimewith

A.tumefaciens.Apreconditioningtimeof72handcocultivationof48hsynergis-tically

increasethetransformationefficiencyto25%.Inaddition,therecoveryoftransgenicnts

canbefacilitatedbyovercominghyperhydration,whichincreasestherootingfrequencyto

100%.

KeyWords:Canola;Agrobacteriumtumefaciens;cocultivation;preconditioning;

exnt;transformation;rooting.

1.Introduction

1.1.ImprovingAgrobacteriumtumefaciens-MediatedTransformation

Agrobacterium-mediatedtransformationremainsthechoiceoftransgenic

ntproductioninmostspecies