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铜绿假单胞菌耐药基因芯片检测技术：原理、应用与展望

一、引言

1.1研究背景与意义

1.1.1铜绿假单胞菌的危害及耐药现状

铜绿假单胞菌（Pseudomonasaeruginosa）作为一种革兰氏阴性需氧杆菌，在自然环境中分布极为广泛，常见于土壤、水、空气以及正常人的皮肤、呼吸道和肠道等。它是一种典型的机会性感染细菌，当机体免疫功能受损或缺陷时，便可能引发严重的甚至是致死性的感染，成为医院感染的主要病原菌之一。在医院内，其可存在于诸多器皿和溶液（如防腐溶液）、导尿器械、眼科用的荧光素和接触镜片用的溶液、盐水、青霉素G溶液、普鲁卡因溶液、实验室用水、空气冷却系统、镊子、注射器、体温表、人工呼吸机等之中，并通过不同途径传播给病人。

铜绿假单胞菌引发的机体感染类型多样，涵盖呼吸道感染、败血症、尿路感染、中枢神经系统感染、耳、乳突及鼻窦旁感染、皮肤及软组织感染、消化道感染、心内膜炎、眼部感染、骨关节感染等。一旦发生全身急性感染，患者的预后情况通常较差。例如，在糖尿病患者中，若引发糖尿病足，铜绿假单胞菌便是可能的致病因素之一；创面的感染也常有它的“身影”。而且，铜绿假单胞菌感染具有传染性，虽然对于免疫系统正常的人群而言，接触后不一定会感染，但其可通过直接接触传播，如接触感染者的分泌物、伤口渗出物或在医疗操作中发生交叉感染等，对于老年人、慢性病患者、接受化疗或器官移植等免疫系统较弱的人群来说，感染风险显著提高。

近年来，铜绿假单胞菌的耐药问题愈发严峻。2024年上半年中国细菌耐药监测网（CHINET）资料显示，PA的分离率在所有分离菌中位居第6位。2014-2019年全国细菌耐药监测网（CARSS）数据表明，PA在革兰阴性菌中占比达8.5%-9.1%，位列第3位。临床上，碳青霉烯类药物的过度使用，致使铜绿假单胞菌对碳青霉烯的耐药性增强，药物选择性降低。尽管随着国家层面管控的加强，以及相关措施下达到医院层面，近年来其对碳青霉烯的耐药率逐渐呈下降趋势，但耐药问题依旧不容忽视。其耐药表现形式主要有碳青霉烯耐药铜绿假单胞菌（CRPA），即对亚胺培南、美罗培南或多利培南任何一种碳青霉烯类抗菌药物耐药的PA；多重耐药铜绿假单胞菌（MDRPA），指对于常见抗菌药物（包括头孢菌素类、碳青霉烯类、β-内酰胺酶抑制剂复方制剂、氟喹诺酮类和氨基糖苷类）中3类或3类以上的药物耐药；“难治”耐药性PA（DTR-PA），是指对哌拉西林/他唑巴坦、头孢他啶、头孢吡肟、氨曲南、美罗培南、亚胺培南、环丙沙星和左氧氟沙星等所有药物均不敏感的PA，该定义从临床治疗角度出发，更具实际意义。

1.1.2传统检测方法的局限性

面对铜绿假单胞菌日益严重的耐药问题，准确且快速地检测其耐药基因显得尤为关键。然而，目前临床实验室多采用的耐药表型检测方法存在诸多弊端。

传统检测方法检测周期长，以常见的细菌培养和药敏试验为例，从样本采集到最终获得准确的药敏结果，往往需要数天时间。这期间患者可能因无法及时得到针对性的治疗，而导致病情延误，增加治疗难度和患者痛苦。而且检测通量低，一次检测通常只能针对少数几种抗菌药物进行耐药性测试，难以全面反映铜绿假单胞菌对多种药物的耐药情况，在面对日益复杂的耐药机制和多基因联合耐药时，显得力不从心。同时，检测结果的准确性受多种因素影响，如样本采集的质量、培养条件的差异、操作人员的技术水平等，这些因素都可能导致结果出现偏差，从而影响临床诊断和治疗决策。此外，传统检测方法还依赖贵重的实验设备，对实验室条件要求较高，操作过程复杂，且在菌株分离处理时存在一定的感染风险，不利于在基层医疗机构或现场进行快速检测。

1.1.3基因芯片检测技术的重要性

基因芯片技术作为在后基因组时代发展起来的新一代标准化开放式高通量技术平台，为解决铜绿假单胞菌耐药检测问题带来了新的契机。

该技术能够在一张芯片上同时对大量的基因进行检测，实现对铜绿假单胞菌多种耐药基因的联合检测，极大地提高了检测通量。通过一次实验，即可获取铜绿假单胞菌对多种抗生素的耐药基因信息，全面了解其耐药机制，为临床治疗提供更丰富、准确的依据。而且，基因芯片检测技术具有快速、灵敏的特点，能够在短时间内完成检测，大大缩短了检测周期，有助于患者及时得到有效的治疗。此外，其检测过程相对自动化，减少了人为因素的干扰，提高了检测结果的准确性和重复性。

在临床应用中，基因芯片技术可以快速预测和诊断铜绿假单胞菌的抗药性，帮助医生根据检测结果及时选用合适的抗生素，避免盲目用药，从而提高治疗成功率，降低治疗成本，减少药物滥用现象。在耐药菌感染的流行病学调查以及制定防控措施方面，基因芯片技术也能发挥重要作用，通过对大量样本的检测和分析，深入