享廷顿蛋白结合蛋白1对胰岛β细胞胰岛素分泌和L型钙通道Cav12胞内运输的影响.pdfVIP

享廷顿蛋白结合蛋白1对胰岛B细胞胰岛素分泌和L型钙通道

Cavl.2胞内运输的影响

亨廷顿蛋白结合蛋白1(hutigti-associatedproteil,HAP1)是最早发

现的能与亨廷顿病(Hutigtosdisease,HD；基因产物亨廷顿蛋白

(hutigti,Htt)相互结合的蛋白质。HAP1具有HAP1A和HAP1B两种剪接体,

既在神经元中表达,也在分泌含氮激素激内分泌细胞中表达。

在神经元内，HAP1参与细胞器和分子的运输、膜受体转运与再循环。HAP1

可通过与驱动蛋白(kiesi)轻链(KLC)和重链(KHC)、驱动蛋白家族运动蛋白

5(KIF5)、动力蛋白激活蛋白复合物的亚单位P150Glucd等微管相关运动蛋白相

互作用，参与或调控神经元内囊泡、神经营养因子、受体等基于微管的运输。

HAP1的胞内运输功能受自身磷酸化程度的影响,HAP1A竣基末端PKA磷酸化

位点(T598)的磷酸化能显著减少其与P150Glued和KLC的结合,抑制其参与的胞

内运输活动,去磷酸化后则相反。IlAPI可能通过神经元内物质运输对神经元的生

长发育、存活、递质释放起调节作用。

在大鼠、小鼠胰岛内,HAP1选择性表达于分泌胰岛素的8细胞内：MIN6.

NITT、INST等胰岛B细胞瘤细胞系也表达HAP：；抑制MIN6和NITT细胞的

HAP1表达能显著抑制其胰岛素的分泌；胰岛B细胞HAP1选择性敲除的小鼠，其

糖耐量能力下降，葡萄糖刺激后的胰岛素分泌减少。由此表明，HAP1与胰岛p细

胞胰岛素的分泌有关。

电位门控钙通道(voltagegatedcalciumcheel,Cav)参与调控葡萄糖刺

激引起的胰岛P细胞胰岛素的分泌,葡萄糖浓度的升高可促进B细胞对葡萄糖的

摄入和代谢，增加ATP-ADP的转化和抑制K+通道活性，使细胞膜去极化并由此使

Cav开放,大量钙离子内流最终引发胰岛素的分泌。B细胞主要表达Cavl.2和

Cavl.3两种亚型的L型钙通道,其中Cavl.2在B细胞胰岛素的分泌中发挥直要

作用。

Cav与多种离子通道一样,在粗面内质网上进行合成组装后，以膜小泡的形

式进入高尔基复合体进一步修饰加工形成囊泡,然后转运至细胞膜,表达在细胞

膜的特定区域。Cav的细胞膜表达量决定.Ca2+内流的大小与动力学。

HAP1是否通过响钙通道的胞内运输、细胞摸表达而响胰岛素的分泌，目

前未见报道。有关调节钙通道膜表达的机制研究表明，肿瘤抑制因子

eIF3ee（ukaryotictranslationinitiationfactor3subunitE）通过与Cavl.2

的结合,调控神经细胞和胰岛B细胞内Cavl.2的双向运输，即从胞质向细胞膜的

转运膜（表达）和从细胞膜向胞质内的转运（内在化，internalization）,从而维持

胞内钙离子的稳态。

eIF3e对Cavl.2逍道蛋白的转运和膜表达的调节作用提示HAP1可能通过与

elF3e蛋白相互作用，调节胰岛P细胞内钙通道的运输,进而响胰岛素的分泌。

本研究在进一步证实HAP1响胰岛B细胞胰岛素分泌的基础上,观察了HAP1表

达水平对B细胞Cavl.2活性、外钙内流、Cavl.2膜表达的响，并分析了B细

胞内HAP1和eIF3e之间的相互作用。

一、HAP1促进胰岛6细胞胰岛素的分泌为了进一步证明HAP1对胰岛B细胞

胰岛素分泌的调节作用，对HAP1基因敲除小鼠血浆胰岛素含量和沉默HAP1对大

鼠胰岛P细胞瘤细胞INS-1细胞胰岛素分泌能力的响进行了检测。放射免疫分

析显示,HAP1基因敲除小鼠血浆中胰岛素含量明显降低；全细胞膜片钳膜电容检

测显示,与野生型和转染表达对照质粒的INST细胞比较,在转染表达

MAPI-SiRNA的INS-1细胞中，无论是即刻释放库(immedia