重组DNA技术的基本工具，DNA的粗提取与鉴定（解析版）.docx

第3章基因工程

第1节重组DNA技术的基本工具，DNA的粗提取与鉴定

学习目标

1.阐明重组DNA技术所需的三种基本工具的作用。

2.认同几英寸的诞生和发展离不开理论研究和技术创新。

3.进行DNA的粗提取与鉴定。

学习重点：重组DNA技术所需三种基本工具的作用。

学习难点：DNA的粗提取与鉴定。

1.基因工程是指按照人们的愿望，通过等技术，赋予生物新的，创造出更符合人们需要的新的。从技术操作的层面看，由于基因工程是在上进行设计和施工的，因此又叫作重组DNA技术。

2.限制性内切酶又称限制酶，主要是从中分离纯化出来的。能够识别双链DNA分子的，并且使每一条链中特定部位的断开。大多数限制酶的识别序列由6个核苷酸组成，也有少数限制酶的识别序列由4个、8个或其他数量的核苷酸组成。DNA分子经限制酶切割产生的DNA末端通常有两种形式——。当限制酶在它它的识别序列的中心轴线两侧将DNA分子的两条链分别切开时，产生；当限制酶在它识别序列的中心轴线切开时产生的是。

3.DNA连接酶是能够将两个连接起来的酶。从大肠杆菌分离得到的DNA连接酶-，只能将末端的DNA片段连接起来；从T4噬菌体中分离获得，既可以连接，又可以缝合，但连接的效率相对较低。

4.基因进入细胞的载体是指将外源基因送入细胞的分子。包括、噬菌体的衍生物、等，其具备的条件有在细胞中，有限制酶切割位点，有特殊的基因。

5.DNA的粗提取与鉴定：原理是DNA酒精，但某些蛋白质。DNA在不同浓度的中溶解度不同，能溶于2mol/L的。DNA遇试剂会呈现。

6.材料选择：选用DNA含量相对较高的生物组织，破碎细胞：称取30g洋葱，切碎，然后放入研钵中，导入10mL研磨液，充分研磨。

7DNA的粗提取的步骤：（1）在漏斗中垫上，将洋葱研磨液过滤到烧杯中，在冰箱中放置几分钟，再取。或直接将研磨液导入塑料中，在r/min的转速下离心min，再取上清液放入烧杯中。

（2）在上清液中加入体积相等的、预冷的酒精溶液（体积分数为），静置，溶液中出现的就是粗提取的DNA。用玻璃棒沿方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸去上面的水分；或将溶液导入离心管中，在r/min的转速下离心，弃上清液，将管底的沉淀物（粗提取的DNA)晾干。

（3）DNA的鉴定:取两支20mL的试管，各加入2mol/L的5mL。将丝状物或沉淀物溶于其中一支试管的中。然后，向两支试管中各加入4mL的试剂。混合均匀后，将试管置于中加热5min。待试管冷却后，比较两支试管中溶液颜色的变化。

【答案】1.转基因遗传特性生物类型和生物产品DNA分子水平

2.原核生物特定核苷酸序列磷酸二酯键黏性末端和平末端粘性末端平末端

3.DNA片段EcoliDNA连接酶互补黏性双链DNA片段互补的黏性末端双链DNA片段的平末端平末端

4.DNA质粒动植物病毒自我复制一个或多个标记

5.不溶于溶于酒精NaCl溶液NaCl溶液二苯胺蓝色

6.（1）纱布4℃上清液离心管15005（2）95%2～3min白色丝状物一个100005min（3）NaCl溶液NaCl溶液二苯胺沸水

1.外源基因在受体细胞表达的理论基础是什么？

①基因是控制生物性状的遗传物质的基本结构和功能单