动物源性饲料中生物胺的测定 高效液相色谱法-副本.docxVIP

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动物源性饲料中生物胺的测定

高效液相色谱法

1范围

本文件规定了动物源性饲料原料中色胺、苯乙胺、腐胺、尸胺、组胺、章鱼胺、酪胺、亚精胺和精胺的高效液相色谱测定方法。

本文件适用于鱼粉、虾粉、鸡肉粉、猪肉粉、肉骨粉、血粉、羽毛粉、鱼溶浆、乌贼膏和蚕蛹粉等动物源性饲料原料中色胺、苯乙胺、腐胺、尸胺、组胺、章鱼胺、酪胺、亚精胺和精胺九种生物胺的测定。

本文件检出限为5mg/kg,定量限为10mg/kg。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于

本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T20195动物饲料试样的制备

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4原理

试样中的生物胺经高氯酸溶液提取、丹磺酰氯衍生，用高效液相色谱仪测定，外标法定量。

5试剂或材料

除非另有规定，仅使用分析纯试剂。

5.1水：GB/T6682,一级。

5.2乙腈：色谱纯。

5.3丙酮。

5.4氨水。

5.5乙酸铵：色谱纯。

5.6乙酸铵溶液(5mmol/L)：称取0.38g乙酸铵(5.5),加水溶解，定容至1L。

5.7高氯酸提取液(0.4mol/L)：准确量取高氯酸32.3mL,用水定容至1L。

5.8氢氧化钠溶液(2mol/L)：准确称取8g氢氧化钠，用水定容至100mL。

5.9饱和碳酸氢钠溶液：向水中加入足量的碳酸氢钠固体直到无法再溶解。

5.10盐酸溶液(0.1mol/L)：准确量取8.3mL浓盐酸，用水定容至1L。

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5.11丹磺酰氯衍生溶液(10mg/mL)：称取1g丹磺酰氯(CAS号：605-65-2,≥99%),用丙酮溶解，定容至100mL。临用现配。

5.12标准储备溶液(1mg/mL)：分别称取色胺(CAS号：1476-39-7,纯度≥99%)12mg、苯乙胺(CAS号：64-04-0,纯度≥98%)13mg、腐胺·二盐酸(CAS号：333-93-7,纯度≥98%)18mg、尸胺(CAS号：462-94-2,纯度≥98.8%)10mg、组胺(CAS号：51-45-5,纯度≥97%)10mg、章鱼胺·一盐酸(CAS号：770-05-9,纯度≥99.3%)12mg、酪胺(CAS号：51-67-2,纯度≥98%)10mg、亚精胺·三盐酸(CAS号：334-50-9,纯度≥99.9%)17mg、精胺(CAS号：71-44-3,纯度≥98%)10mg（精确至0.01mg),分别置于10mL棕色容量瓶中，用盐酸溶液(5.10)溶解并定容。于-18℃以下保存，有效期为6个月。

注：标准溶液的配制浓度以各生物胺的单体计算，称取标准品时对其中的盐酸盐进行折算。所有标准溶液配制好后转移至密闭棕色容器中，避光贮存。

5.13混合标准中间溶液(100μg/mL)：准确移取各生物胺标准储备溶液(5.12)1mL于10mL棕色容量瓶中，用盐酸溶液(5.10)定容。于2℃~8℃保存，有效期为1周。

5.14混合标准系列溶液：准确移取适量混合标准中间溶液(5.13)于10mL棕色容量瓶中，用水(5.1)稀释定容配成系列标准溶液，浓度分别为：0.25μg/mL、0.5μg/mL、5.0μg/mL、10.0μg/mL、25.0μg/mL、50.0μg/mL、100.0μg/mL。临用现配。

5.15微孔滤膜：0.22μm,有机系。

6仪器设备

6.1高效液相色谱仪：配有紫外检测器或二极管阵列检测器。

6.2分析天平：感量0.1mg和0.01mg。

6.3恒温摇床：控温精度±1℃。

6.4旋涡混匀器。

6.5离心机：转速不低于5000r/min。

6.6氮吹仪。

6.7超声波清洗器。

6.8匀浆机。

7样品

7.1固体

按GB/T20195制备样品，至少100g,粉碎使其全部通过0.42mm孔径的分析筛，充分