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马蹄金高频再生与遗传转化体系的构建及优化研究

一、引言

1.1研究背景

马蹄金（DichondrarepensForst.），隶属旋花科马蹄金属，是多年生草本植物，常被用于园林、公园、庭院等地的绿化。马蹄金具有众多优点，其叶片小巧圆润，呈绿色或淡绿色，密集生长，能形成如绿色地毯般整齐美观的草坪，具有较高的观赏价值，为城市绿化和景观营造增添了自然宁静的氛围。在适应性方面，马蹄金对土壤要求不苛刻，耐贫瘠，在肥力较低的土壤中也能生长，且抗盐碱能力强，在一些轻度盐碱化地区也可种植；耐阴性良好，能在树荫下或建筑物阴影处生长，弥补了其他草种在遮蔽环境中难以存活的缺陷；对水分条件适应范围广，既耐旱又耐湿，在干旱或短期洪涝环境下都有一定的耐受性。此外，马蹄金生长速度适中，不需要频繁修剪，抗病虫害能力较强，减少了化学农药的使用频率，种植后成坪快，维护成本相对较低，还具有固土保水、防止水土流失的生态价值，能为昆虫提供食物来源，促进生物多样性。

然而，在实际应用中，马蹄金也面临一些问题。在气候方面，马蹄金不耐寒，冬季气温低于零度时易受冻害，在北方寒冷地区种植时需要采取防寒措施，限制了其在北方地区的广泛应用；在夏季极端炎热天气下，马蹄金可能会出现黄化现象，影响美观度和草坪的整体质量。从病虫害角度来看，马蹄金在夏季高温高湿环境下易感染白绢病和叶斑病，叶片较嫩且汁液含量高，受黏虫侵害十分严重，严重时会导致草坪斑秃、枯萎，影响草坪的景观效果和使用功能。此外，马蹄金繁殖力较强，如果没有及时控制，可能会侵占周围植物空间，影响整体景观效果，且在一些环境中，马蹄金还易受杂草危害，与杂草竞争养分、水分和光照，降低草坪的品质。

为解决马蹄金在实际应用中面临的问题，提升其应用价值和适应性，构建高频再生体系和遗传转化体系具有重要意义。高频再生体系可以实现马蹄金的快速繁殖，为大规模种植提供充足的优质种苗，还能通过组织培养技术对马蹄金进行脱毒处理，提高种苗质量，减少病虫害的发生。遗传转化体系则能够将外源基因导入马蹄金细胞中，通过基因工程手段改良马蹄金的性状，如增强其抗寒性、抗病性、抗虫性等，培育出更适应不同环境条件和具有更高观赏价值的新品种。

1.2研究目的与意义

本研究旨在通过组织培养技术，以马蹄金的子叶为试材，对愈伤组织和不定芽的形成进行系统研究，建立稳定、高频的再生体系，优化各培养阶段的条件，提高再生效率。同时，采用农杆菌侵染方法，深入探讨影响转化的因素，初步建立马蹄金的遗传转化系统。

通过建立马蹄金高频再生体系和遗传转化体系，为马蹄金的诱变育种、细胞工程操作和基因工程操作奠定坚实基础。在诱变育种方面，高频再生体系提供了大量可供诱变处理的材料，结合遗传转化体系导入有益突变基因，能够加速优良性状的筛选和培育。在细胞工程领域，高频再生体系有助于开展体细胞杂交等技术研究，拓宽马蹄金的遗传基础。在基因工程方面，遗传转化体系使得将外源抗寒、抗病、抗虫等基因导入马蹄金成为可能，从而培育出具有更强抗逆性和适应性的新品种，解决马蹄金在应用中面临的冬季易枯黄、夏季易染病、易受虫害和杂草危害等问题，进一步提升其在园林景观、生态修复等领域的应用价值，推动马蹄金产业的发展。

二、文献综述

2.1马蹄金概述

2.1.1植物学特性

马蹄金隶属旋花科马蹄金属，为多年生匍匐小草本植物。其茎细长，被灰色短柔毛，节上生根，这种独特的茎部特征使其能够在地面快速蔓延生长。叶片呈肾形至圆形，叶面微被毛，背面被贴生短柔毛，全缘，具有长叶柄，叶形小巧可爱，一般直径1-3厘米，互生的叶片有序排列，为植株增添了独特的美感。花单生叶腋，花柄短于叶柄，丝状，萼片倒卵状长圆形至匙形，钝，背面及边缘被毛；花冠钟状，较短至稍长于萼，黄色，无毛，在叶腋间悄然绽放，虽花朵小巧，却为马蹄金增添了别样的生机。雄蕊5枚，着生于花冠2裂片间弯缺处，花丝短，等长；子房被疏柔毛，2室，具4枚胚珠，花柱2枚，柱头头状，这些花蕊结构为其繁殖后代奠定了基础。马蹄金的蒴果近球形，小，短于花萼，膜质，内含有1-2枚种子，种子呈黄色至褐色，无毛，花期4-5月，果期7-8月，在适宜的季节里完成其生长、繁殖的生命周期。

2.1.2生物学特性

马蹄金喜光照又耐荫蔽，在光照充足的环境下能进行充分的光合作用，积累养分，促进植株生长；在荫蔽环境中，如林下、建筑物背阴处等，也能凭借其较强的耐阴性正常生长，这一特性使其适应多种不同光照条件的生长环境。它偏好温暖、湿润的气候，主要生长于山坡草地、路旁或沟边等环境，在这些地方，马蹄金能够充分利用土壤中的水分和养分，实现自身的生长繁衍。

马蹄金主要通过无性繁殖方式进行自我扩展，其匍匐茎上的节间能够生根发芽，形成新的植株，这种繁殖方式高效且迅速，有利于其