DB52_T 1869-2025 猪体细胞培养与冷冻保存技术规程.docxVIP

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52

贵州省地方标准

DB52/T1869—2025

猪体细胞培养与冷冻保存技术规程

Technicalregulationofpigcellcultureandcryopreservation

2025-03-06发布2025-06-01实施

贵州省市场监督管理局发布

I

DB52/T1869—2025

目次

前言 II

1范围 1

2规范性引用文件 1

3术语和定义 1

4缩略语 1

5基本要求 2

6体细胞采集 2

7体细胞体外培养 3

8冷冻保存 4

9复苏和活力鉴定 4

附录A （资料性）实验准备5

附录B （资料性）试剂与要求6

附录C（资料性）细胞冻存和复苏登记表 7

DB52/T1869—2025

II

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由贵州省畜牧兽医研究所提出。

本文件由贵州省农业农村厅归口。

本文件起草单位：贵州省畜牧兽医研究所，贵州省畜禽遗传资源管理站、贵州省种畜禽种质测定中心、松桃苗族自治县农业农村局、贵州省动物疫病预防控制中心、黔西市农业农村局、道真县畜牧渔业发展服务中心、万山区畜牧技术推广站。

本文件主要起草人：谭娅、杨齐心、吴玙彤、黄智宇、李晨、熊力、齐婧、石丽娟、杨阿明、邱家俊、裴国海、张正群、张静、卢昱希、赵春萍、杜春林、姚敏、龙清孟、李平、杨红文、申李、何润霞、姚建军。

DB52/T1869—2025

1

猪体细胞培养与冷冻保存技术规程

1范围

本文件规定了基本要求、体细胞采集、体细胞体外培养、体细胞鉴定、冷冻保存、复苏和活力鉴定的内容与方法。

本文件适用于猪耳组织、脂肪组织、肌肉组织的体细胞采集、体外培养、冷冻保存及复苏和活力鉴定方法。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T5458液氮生物容器

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB19489实验室生物安全通用要求

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

原代细胞primarycells

直接从动物的组织或器官，将其分散成为单个细胞后，在人工条件下培养使其存活、生长、增殖并开始体外培养的细胞。

3.2

体细胞somaticcells

来源于受精卵，并携带生物个体全部遗传信息的一类细胞。

3.3

细胞冷冻保存cellscryopreservation

将体外培养的细胞与细胞冻存液按一定的比例混合后，按照设定的降温程序降温，最后浸入液氮中进行长期保存的方法。

4缩略语

下列缩略语适用于本文件。

PBS：磷酸盐缓冲液（PhosphateBufferSaline），主要成分为磷酸盐酸二氢钠、磷酸盐氢二钠、氯化钠，主要用来洗涤细胞。

消化Buffer：消化缓冲液，多为浓度为20g/L的牛血清白蛋白，对细胞主要起到机械保护作用。

2

DB52/T1869—2025

IF：免疫荧光染色（Immunofluorescence），基于抗原-抗体特异性反应，将荧光物质（最常用的是荧光素）标记于抗原或抗体上，当其与相应抗体或抗原结合后，就会在荧光显微镜下呈现特异性的荧光反应。

qPCR：实时荧光定量PCR（Real-timeQuantitativePCR）是一种在DNA扩增反应中，以荧光化学物质测每次聚合酶链式反应（PCR）循环后产物总量的方法。

5基本要求

5.1实验室

实验室符合GB19489要求。工作区应设置准备室、缓冲间、无菌间、细胞保存室等。其中，缓冲间面积不得小于3m2，应设置更衣柜和紫外灯，紫外灯强度不得低于1.5W/m3。紫外灯管距地面不应超过

2.5m，每次照射时间不少于30min。无菌室的无菌等级最低标准应达到C级，操作区应达到B级，温度应控制在20℃~24℃,湿度应控制在4