《豌豆基因编辑技术体系构建技术规程》.docxVIP

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SAASS

团体标准

T/SAASS332—2026

豌豆基因编辑技术体系构建技术规程

Technicalcodeofpracticeforestablishinggeneeditingsysteminpea

2026-02-11发布2026-02-11实施

山东农学会发布

T/SAASS332—2026

I

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由山东省农业科学院提出。

本文件由山东农学会归口。

本文件起草单位：山东省农业科学院、盐碱地综合利用技术创新中心。

本规程起草人：李冠、李娜娜、贾凯华、杨永义、李润芳、田汝美、刘敏、白静、谢坤、宫永超。

T/SAASS332—2026

1

豌豆基因编辑技术体系构建技术规程

1范围

本文件规定了豌豆基因编辑技术体系构建的试验平台条件、体系构建准备、体系构建流程和档案管理技术要求。

本文件适用于采用CRISPR/Cas基因编辑技术开展豌豆基因功能研究、基因编辑育种相关研究、材料创制及技术操作。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB19489实验室生物安全通用要求

GB/T27428植物生物安全实验室通用要求

GB/T46433.1生物技术基因组编辑第1部分:术语

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4缩略语

下列缩略语适用于本文件。

A.Rhizogenes：根瘤菌（Agrobacteriumrhizogenes）

bp：碱基对（BasePair）

Cas9：CRISPR关联基因编码的蛋白（CRISPRassociated9）

CRISPR：成簇规律间隔短回文重复序列（ClusteredRegularlyInterspersedShortPalindromicRepeats）

U6snRNA：小核RNA（smallnuclearRNA）

DH5α：一种大肠杆菌菌株，常用于分子克隆实验，是一种高效的DNA转化宿主。

DNA：脱氧核糖核酸（DeoxyribonucleicAcid）

E.Coli：大肠埃希氏菌（Escherichiacoli）

GoldenGate：一种基因组拼接技术，通过限制性内切酶和DNA连接酶高效拼接多个DNA片段。

Hi-TOM：用于高通量突变检测的在线工具，主要用于基因编辑后的突变鉴定。

K599：一种根瘤菌菌株，广泛用于植物转基因实验中的基因导入。

NGG：PAM序列中的常见三核苷酸（N表示任何碱基，G是鸟嘌呤）

OD600：600nm波长下的光密度（OpticalDensityat600nm）

PAM：识别序列（ProtospacerAdjacentMotif）

PCR：聚合酶链式反应（PolymeraseChainReaction）

sgRNA：单链引导RNA（SingleGuideRNA）

sgRNAscaffold：sgRNA支架结构，是CRISPR/Cas9系统中引导RNA的一个部分，帮助保持其结构功能。

tRNA：转运RNA（TransferRNA）

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2

TY:胰蛋白胨和酵母提取物组成的一种培养基(TryptoneandYeastextract),用于微生物的培

养。

5基本要求

5.1实验场所

实验场所及设施应符合GB19489、GB/T27428及植物基因工程相关生物安全管理规定。

5.2仪器设备

所需仪器设备包括PCR仪、核酸电泳与凝胶成像系统、超微量分光光度计、高速离心机、涡旋振荡器、恒温培养箱、恒温摇床、超净工作台及高压灭菌锅。用于豌豆无菌苗和转化材料培养的设施应具备温度、光周期及湿度可调控功能。

6体系构建准备

6.1植物材料

选用适合进行农杆菌转化的豌豆品种或其他合适的基因型材料。

6.2菌株

E.ColiDH5α用于质粒克隆与扩增；A.rhizogenesK599用于豌豆遗传转化，见附录A.1。

6.3