第五章微生物的生长和环境条件.pptVIP

微生物培养的目的各有不同，有些是以大量增殖微生物菌体为目标（如单细胞蛋白或胞内产物），有些则是希望在微生物生长的同时，实现目标代谢产物的大量积累。由于培养目标的不同，在培养方法上也就存在许多差别。;从历史发展的角度来看，微生物培养技术的发展主要有以下特点：

①从少量培养发展到大规模培养；

②从浅盘培养发展到厚层固体或深层（液体）培养；

③从以固体培养为主发展到以液体培养为主；

④从静止式液体培养发展到通气搅拌式液体培养；

⑤从分批培养发展到连续培养以至多级连续培养；

⑥从游离的微生物细胞培养发展到利用固定化细胞培养；

⑦从单一微生物培养发展到混合微生物培养；

⑧从利用野生菌种发展到利用变异菌株以及“工程菌”。;一、投料方式

1、分批培养

2、连续培养

3、补料分批培养

二、培养状态

1、固体培养

2、液体培养;一、投料方式;;延滞期

少量细菌接种到新鲜培养基后，一般不立即进行繁殖，生长速度近于零。因此在开始一段时间，细菌数几乎保持不变，甚至稍有减少。这段时间被称为延迟期，又称为迟缓期、调整期或滞留适应期。;A、微生物接种到一个新的环境，暂缺乏足够的能量和必需的生长因子；

B、“种子”老化（即处于非对数生长期）或未充分活化。

C、接种时造成的损伤;（2）延滞期的特点;指数期

对数期又称指数期。这一阶段突出特点是细菌数以几何级数增加，代时稳定，细菌数目的增加与原生质总量的增加，与菌液混浊度的增加均呈正相关性。

;特点

1）生长速率常数R最大代时最短，生长速度最快；

2）细胞稳定（平衡）生长：细胞内各种物质按比例生长，菌体成分均匀；

3）酶系活跃，代谢旺盛。;稳定期;（2）特点：

1）生长常数为零，新生=死亡，达到动态平衡；

2）活菌数的总量达到最大值；

3）胞内的储藏物开始形成（如肝糖粒、脂肪粒等）；

4）某些芽孢菌的芽孢开始形成；

5）某些细菌过量积累次级代谢产物，如抗生素、维生素等。;衰亡期

特点：

1）细菌代谢活性降低；

2）细菌衰老并出现自溶；

3）产生或释放出一些产物；如氨基酸、转化酶、外肽酶或抗生素等。

4）菌体细胞呈现多种形态，有时产生畸形，细胞大小悬殊；有些革兰氏染色反应阳性菌此时会变成阴性反应;2、连续培养;

连续发酵的优点：

1、高效

2、产品质量较稳定

3、节约了大量动力、人力、水和蒸汽，且使水、气、电的负荷均衡合理。

缺点：

1、菌种易退化

2、易污染杂菌

3、营养物的利用率一般低于单批增大。;

恒化器：与恒浊器相反，是一种设法使培养液流速保持不变，并使微生物始终在低于其最高生长速率条件下进行生长繁殖的一种连续培养装置。

恒浊器：根据培养器内微生物的生长密度，并借光电控制系统来控制培养液流速，以取得菌体密度高，生长速度恒定的微生物细胞的连续培养器。

;恒浊器与恒化器的比较;固定化细胞连续培养

细胞固定化就是通过包埋法、微胶囊化、吸附法等手段，将微生物细胞限制在载体的内部或表面。

固定化细胞培养与游离细胞培养相比，有以下一些优势：①固定化可提供较高的细胞密度；②固定化减少了细胞的流失，使细胞可以反复利用；③固定化可以提供对细胞有利的微环境；④可以保护某些细胞免受剪切损伤；⑤简化了下游的细胞分离步骤。;;固定化载体常常易碎，且固定的细胞容易脱落等原因的存在，固定化细胞培养器中的剪切力也不宜过高，一般采用填充柱、流动床或气升式反应器。机械搅拌式反应器只适用于载体牢固、不易脱落的固定化细胞。通常是将固定化细胞装在反应器内，一端流入培养基，另一端放出发酵液，而固定化微生物细胞始终停留在反应器内。;3、补料分批发酵

在生产实践中．完全封闭式的分批培养或纯粹的连续培养较为少见，更多见的是两者的折中形式——补料分批或流加发酵。

补料发酵是根据菌株生长和初始培养基的特点，在分批培养的某些阶段适当补加部分配料成分或碳源，以提高菌体或代谢产物的产率。

流加营养：水解糖（葡萄糖）、氨水;补料分批发酵的特点有：

1）可以减弱底物和代谢产物的抑制。微生物的生长会受到高浓度底物和逐步过量产生的代谢产物的抑制，若将初始底物浓度降低，就会限制菌体密度和产物浓度的提高。但采用间歇补料．通过不断的流加限制性底物就可克服该缺点。可以避免葡萄糖效应对微生物生长和产物积累的影响。流加补料还可稀释降低代谢产物的浓度，减轻其抑制生长作用。

2）增加次级代谢产物的产量。次级代谢产物的合成常常在生长平衡期才开始合成，与稳定期的细胞密度和延续时间密切相关。但间歇发酵的平衡期比较短，因营养物质已大量消耗．可同化量很少．很快就进入衰亡期。通过补料可延长平衡期．增加次级代谢产物的产量。;3）可以提高发酵的细胞密度。补料发酵时不断地向发酵罐补偿限制性底物，微生物始终能获得充分的营养，菌体密度就可以增加，合理改进发酵