CN108384744A 一种曲面蛋白微图案化制作方法 （北京航空航天大学）.docxVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利申请

(10)申请公布号CN108384744A

(43)申请公布日2018.08.10

(21)申请号201810045289.7

(22)申请日2018.01.17

(71)申请人北京航空航天大学

地址100191北京市海淀区学院路37号

(72)发明人孙艳樊瑜波浑婷婷王玮刘姚萍

(74)专利代理机构北京科迪生专利代理有限责任公司11251

代理人安丽

(51)Int.CI.

C12N5/07(2010.01)

C12N5/071(2010.01)

权利要求书1页说明书5页附图3页

(54)发明名称

一种曲面蛋白微图案化制作方法

(57)摘要

CN108384744A*x885R8ok本发明涉及一种曲面蛋白微图案化制作方法，属于材料与组织工程领域，涉及曲面及管腔的内表面复杂图案化以及后续细胞的规定性排列。本发明方法包括：PDMS曲面或管腔基底的制作及表面处理，ParyleneC多孔膜与管腔紧密性贴合，曲面上孵育FN蛋白经过渗透得到复杂蛋白图案，接种一定密度细胞样品使细胞规定性排布与生长。本实验可高度模拟细胞在体内复杂曲面

CN108384744A

*x885R8ok

CN108384744A权利要求书1/1页

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1.一种曲面蛋白微图案化制作方法，其特征在于包括：

将聚合物材料介质倒入可拆卸的模具中；

在所述模具内所述聚合物材料中插入不同直径的光滑杆，所述光滑杆从所述聚合物材料和模具中剥离，得到不同孔径的聚合物材料空管；

制作包含不同形状、大小和设定图案分布的微孔的多孔膜；

所述多孔膜在所述聚合物材料空管的所述管腔内曲面紧贴；

在所述多孔膜上滴加包含粘附蛋白的试剂，所述粘附蛋白通过所述多孔膜上的所述微孔渗透到所述多孔膜下层的所述管腔内曲面上，从所述管腔内表面揭下所述多孔膜，所述粘附蛋白按照所述多孔膜上的所述微孔的设定微图案分布在所述管腔内曲面上；

所述多孔膜上的微孔图案与管腔内曲面上微图案一致，微图案为根据不同的细胞粘附需要设置的特定图案；

接种细胞前用表面活性剂处理，加强无蛋白管腔内表面的疏水性；

将细胞接种于所述管腔内曲面上，所述细胞会在所述管腔内表面上按照所述粘附蛋白的设定微图案上粘附生长。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述聚合物材料为PDMS。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述光滑杆指不同直径经过抛光处理的表面光滑无瑕疵的金属棒或玻璃棒。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述光滑杆的直径为1mm～6mm。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：还包括将所述聚合物材料抽真空去气泡后在65℃加热4小时，凝固后放入丙酮中使所述聚合物材料溶胀，导致所述光滑杆自然剥离。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述多孔膜材料为聚对二甲苯。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述多孔膜由事先设计的微图案经光刻技术制得。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：还包括将所述多孔膜加热软化后浸入酒精中至所述多孔膜上的所述孔洞内充满酒精，同时对所述管腔内曲面进行亲水处理，然后将所述多孔膜置于所述管腔内曲面上，干燥使所述多孔膜在所述管腔内曲面上紧贴。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述粘附蛋白为细胞外基质蛋白，包括纤维粘连蛋白、层粘连蛋白或胶原。

10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述多孔膜上的微孔图案与管腔内曲面上微图案一致，微图案为根据不同的细胞粘附需要设置的特定图案；所述特定图案为：内皮细胞为边长17.5μm六边形微图案，心肌、骨骼肌和平滑肌细胞为宽20μm长40μm的长方形微图案。

11.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：接种细胞前用表面活性剂普兰尼克(Pluronic127)1mg/ml处理5分钟，加强无蛋白管腔内表面的疏水性，便于细胞粘附在粘附蛋白微图案上。

12.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述细胞是包括哺乳动物细胞或原生动物细胞。

CN108384744A说明书1/5页

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一种曲面蛋白微图案化制作方法

技术领域

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