通过碱裂解SDS大规模制备质粒DNA.pdfVIP

的质粒通过碱裂解和SDS：大规模

JosephSambrook和DavidW.Russell

本协议改编自由《分子克隆》，第三版，作者JosephSambrook和DavidW.Russell。

ColdSpringHarborLaboratoryPress，纽约冷泉港，2001年

引言

质粒从大规模（500毫升）细菌培养物中通过碱和SDS处理分离出来。

材料

A碱裂解液I

通过色谱法纯化质粒），在使用前可以向无菌的碱裂解液I中补充适量的20mg/ml的无RNA酶的RNase

对于将要通过色谱法进一步纯化的质粒（请参阅

A（胰核糖酶），使其终浓度达到100μg/ml。

碱裂解液II

碱裂解液III

用于质粒选择的抗生素

氯霉素(34mg/ml)

乙醇

可选，请参见第5步。

异丙醇

溶菌酶(10mg/ml)

在Tris‑Cl(pH8.0)中新鲜配制溶液。

限制性内切酶

请参见第4步。

R中等介质

PreparationofsmidbyAlkalineLysiswithSDS:Maxipreparation

JosephSambrookandDavidW.Russell

ThisprotocolwasadaptedfromMolecularCloning,3rdedition,byJoseph

SambrookandDavidW.Russell.ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpring

Harbor,NY,USA,2001

INTRODUCTION

smidisisolatedfromlarge-scale(500ml)bacterialculturesbytreatmentwithalkaliandSDS.

MATERIALS

AlkalinelysissolutionI

Forpreparationsofsmidthataretobesubjectedtofurtherpurificationbychromatography(pleaseseePurificationofsmidby

Chromatography),sterileAlkalinelysissolutionImaybesupplementedjustbeforeusewiththeappropriatevolumeof20mg/ml