研究者发起的抗肿瘤体细胞临床研究细胞制剂制备和质量控制规范.pdfVIP

研究者发起的抗肿瘤体细胞临床研究细

胞制剂制备和质量控制规范

原料采集与处理

用于制备抗肿瘤体细胞制剂的原料细胞主要来源于患者自体或异

体健康供体。采集前应对供体进行全面的医学评估，包括病史询问、

体格检查、实验室检查（如血常规、生化指标、感染性疾病筛查等），

以确保供体符合采集要求。自体外周血单个核细胞采集一般采用血细

胞分离机进行，采集量根据患者体重和后续制备工艺确定，通常为2

-5×10个细胞/kg体重。采集过程需严格遵循无菌操作原则，使

用一次性无菌采集耗材，并在采集后立即进行后续处理。对于异体供

体的细胞，需获得供体的知情同意，并对供体进行长期的随访，以监

测可能出现的不良反应和潜在疾病的发生。

采集后的原料细胞应尽快进行处理，以保证细胞的活性和功能。

首先，使用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞，去除血浆、红细

胞等成分。然后，用生理盐水或细胞培养液多次洗涤细胞，以彻底清

除残留的血浆蛋白和其他杂质。对于需要进一步活化或修饰的细胞，

可采用特定的细胞因子、抗体或基因载体进行处理。如制备细胞毒性

T淋巴细胞（CTL）时，可在培养液中添加白细胞介素-2（IL-2）、

抗CD3单克隆抗体等刺激细胞活化增殖。处理过程中应严格控制细胞

培养条件，包括温度、pH值、氧气和二氧化碳浓度等，以促进细胞的

生长和分化。

细胞培养与扩增

细胞培养是制备抗肿瘤体细胞制剂的关键环节，应在专门的细胞

培养实验室中进行，严格遵守无菌操作规范。选用的细胞培养液应符

合相关标准，含有细胞生长所需的营养成分和生长因子。对于特殊类

型的细胞，如肿瘤浸润淋巴细胞（TIL），还需添加特定的细胞因子和

添加剂以促进其生长和增殖。细胞培养过程中，要定期观察细胞的形

态、生长状态和密度，及时更换培养液和进行传代培养。

在细胞扩增阶段，需根据细胞的特点和制备工艺选择合适的培养

方式，如静置培养、动态培养或三维培养等。动态培养可以提供更好

的营养物质传递和气体交换，有利于细胞的生长和增殖。可采用生物

反应器进行大规模的细胞培养，以提高细胞的产量和质量。在培养过

程中，要严格控制培养时间和传代次数，避免细胞的老化和基因突变。

一般来说，细胞的传代次数应控制在10代以内，培养时间不宜超过

2-3周。

细胞处理与修饰

为增强抗肿瘤体细胞的疗效，可对细胞进行处理和修饰。基因修

饰是一种常用的方法，通过将特定的基因导入细胞中，使其表达具有

抗肿瘤活性的蛋白质或分子。常用的基因载体包括病毒载体（如慢病

毒、腺病毒等）和非病毒载体（如质粒、脂质体等）。在进行基因修

饰时，要严格控制基因载体的质量和转染效率，确保基因的稳定表达

和安全性。

除基因修饰外，还可对细胞进行免疫磁珠分选、细胞因子处理和

化学修饰等。免疫磁珠分选可以富集具有特定表型和功能的细胞，提

高细胞制剂的纯度和活性。细胞因子处理可以调节细胞的免疫功能和

增殖能力，增强其抗肿瘤效果。化学修饰可以改变细胞的表面性质和

功能，提高细胞的靶向性和归巢能力。在进行细胞处理和修饰时，要

进行充分的实验研究和质量控制，确保处理和修饰后的细胞符合临床

应用的要求。

细胞收获与纯化

细胞培养达到预期的数量和质量后，即可进行收获。收获过程中，

要严格控制细胞的离心速度和时间，避免细胞的损伤和死亡。收获后

的细胞需进行纯化处理，以去除细胞碎片、死细胞和其他杂质。常用

的纯化方法包括密度梯度离心、过滤和免疫亲和层析等。密度梯度离

心可以根据细胞的密度差异进行分离和纯化，过滤可以去除大颗粒的

杂质和细胞聚集体，免疫亲和层析可以特异性地捕获和纯化具有特定

抗原的细胞。

在细胞纯化过程中，要进行质量控制，检测细胞的纯度、活性和

回收率。细胞的纯度应达到90%以上，活性应不低于80%，回收率应

不低于70%。纯化后的细胞可以用生理盐水或细胞保存液进行悬浮，

调整细胞浓度至合适的范围。

细胞保存与运输

细胞制剂在临床应用前需要进行保存和运输。细胞保存应采用低

温保存方法，如液氮保存或-80℃冰箱保存。液氮保存可以长期保

持细胞的活力和功能，是目前最常用的细胞保存方法。在进行液氮保

存时，要使用专用的液氮容器和冻存管，并添加合适的冻存保护剂

（如DMSO、甘油等），以减少细胞在冻存过程中的损伤。

细胞运输过程中，要确保细胞的温度和环境条件稳定，避免细胞

受到震