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艾滋病筛查实验室标准操作规程

一、人类免疫缺陷病毒抗体检测（酶联免疫法）

（一）科华生物

1.操作方法：

(1)将试剂盒平衡至室温，取出所需的条板，剩余的即

时封存。

(2)用去离子水合蒸馏水25倍稀释浓缩洗涤液。

(3)将所需数量的条板固定于支架按顺序编号设置样品

孔、外部对照孔、阳性对照孔和阴性对照孔每次实验需设

外部对照阳性对照2孔、阴性对照1孔。

(4)在样品孔中加入100ul待测样品，阴性、阳性对照

及外部对照每孔加入100ul，轻拍混匀。

(5)置37℃温育60分钟。

(6)置洗板机用洗涤液充分洗涤5遍，扣干。

(7)每孔加入100ul酶标记物，轻拍混匀，置37℃温育

30分钟。

(8)重复步骤⑥。

(9)在所有孔内加显色A、显色B剂各50ul，轻拍混匀，

置37℃避光温育30分钟。

(10)每孔加入50ul终止液终止显色反应，用酶标仪（双

波长450nm/630nm）测定各孔A值。

2.结果判定：

(1)临界值Cutoff＝0.1﹢阴性对照的平均A值（阴性

对照的平均A值小于0.08按0.08计算，大于0.08按实际

值计算），样品的A值≥Cutoff值为艾滋病抗体阳性；样品

的A值〈Cutoff值为艾滋病抗体阴性。

(2)同时满足以下条件的实验是有效的。

①NC0.080

②PCx0.8，抗-艾滋病-2阳性对照OD值0.3

③双波长读数，显色剂空白≦0.040，单波长读数，

显色剂空白≦0.080.

④计算COV：COV=PCxX10%（若PCx2.5按2.5计算）

初筛阳性者应重新取样进行双盲复试，复试阳性者应按

照“全国艾滋病检测管理规范”送艾滋病确认实验室进行相

关确认试验。

（二）万泰生物

1.操作方法：

(1)配液：将浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水20倍稀释。

(2)编号：将样品对应微孔板按序号编号，每板应设阴

性对照3孔，阳性对照1型，2型各1孔，空白对照1孔。

（用双波长检测，可不设空白对照孔）。

(3)加样：分别在相应孔中加入待测样品或阴性，阳性

对照100ul.

(4)温育：用封板膜封板后，置37±1℃温育60±2分钟。

(5)洗板：小心揭掉封板膜，用洗板机洗涤5遍，最后

一次尽量拧干。

(6)加酶：每孔加入酶标试剂100ul，空白孔除外。

(7)温育：用封板膜封板后，置37±1℃温育30±1分钟。

(8)洗板：操作同步骤5.

(9)显色：每孔加入显色剂A，B液各50ul，轻轻振荡混

匀，37±1℃避光显色30±1分钟。

(10)测定：每孔加终止液50ul，轻轻振荡混匀，10分

钟内测定结果。设定酶标仪波长于450nm处（建议用双波长

450nm/600-650nm），用空白孔凋零后测定各孔A值。

2.结果判读：

(1)阴性对照孔A值≤0.10，阳性对照孔A值≥0.80，

否则实验无效。

(2)若有1孔阴性对照A值大于0.1应舍弃；若两孔或

两孔以上阴性对照A值大于0.1，实验无效。

(3)阴性判定：样品A值＜临界值（CUTOFF）者为艾滋

病抗体阴性。

(4)阳性判定：样品A值≥临界值（CUTFF）者为艾滋病

抗体阳性（注意：初试阳性应重新取样双孔复试。复试阳性

者按《全国艾滋病检测技术规范》送艾滋病确证实验室进行

确证实验。）

二、丙型肝炎病毒抗体检测（酶联免疫法）

1.操作步骤：

(1)配液：浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水20倍稀释。

(2)编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照3孔，

阳性对照2孔和空白对照1孔（空白对照孔只加稀释液不加样品及

酶标试剂）其余各孔加入100UL样本稀释液。

(3)