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第四章细胞培养与代谢调控

一、细胞培养概述细胞培养是指从体内组织分离细胞，模拟体内环境，在无菌、适当条件下使其生长繁殖一种技术。细胞培养的对象是单个细胞或细胞群。细胞培养影响的环境因素：营养、pH、渗透压、溶解氧、光照、剪切力等。

1、细胞培养发展简史及有关概念1907年，美国生物学家哈里森将蛙胚的神经组织培养在淋巴液中，保持存活了几周，并观察了神经突起的生长现象。被称为“细胞（组织）培养之父”。Carrel1912年提出无菌操作技术，1923年又设计了卡氏培养瓶。现在，细胞培养技术已经成为现代医学研究中的一项重要的手段。近年来，细胞培养技术在细胞生物学、分子生物学、遗传学、药理学、免疫学、老年学、肿瘤学和病毒学以及临床各学科领域中得到广泛的应用，并取得了丰硕成果。

1）细胞培养（cellculture）是指将组织取出后，用化学或物理的方法，将其分散成单个细胞在体外条件下进行培养。细胞在培养的过程中不再形成组织。培养物是单个细胞或细胞群。从广义上讲，体外(invitro)培养包括所有结构层次的培养，即器官培养、组织培养和细胞培养。2)组织培养（tissueculture）指从体内取出组织，在体外模拟体内生理条件，在无菌、适当温度和一定营养条件下，使之生存和生长并维持其结构和功能的方法。此时可能有组织分化并保持组织的结构与功能。培养物是组织碎块或器官的一部分。

3）器官培养（organculture）指器官的胚芽、整个器官在体外条件下的保存或生长，此时亦能有器官的分化并保持器官的立体结构和功能。实际上，在体外培养时，无论采用什么方法和条件，培养的主要成份仍然是细胞。另外，细胞培养也并不意味着细胞彼此是独立的，细胞在培养中的生命活动和体内细胞一样，仍然是相互依存，呈现一定的“组织”特性。所以组织培养和细胞培养并无严格区别，常用作同义语使用。

4）原代培养(primaryculture)将机体取出的细胞或组织进行实效（立即）培养的过程，又称初培养。初培养的细胞大约增殖10代左右，这样的细胞称为原代细胞。5）传代培养(passageculture)指从原代培养的细胞继续转接培养，又称继代培养。

6）细胞系（cellline）由原代培养产生的能进行无限次传代培养的细胞群即成细胞系。此时细胞发生了遗传突变，染色体呈亚二倍体或非整倍体，失去接触抑制特性。目前常用的细胞系有：3T3（小鼠胚胎成纤维细胞）；CHO（正常中国仓鼠卵巢细胞）；L（小鼠肿瘤细胞）；BHK（叙利亚仓鼠肾）；Hela（人宫颈癌细胞)7）细胞株（cellstrain）原代培养细胞能顺利传代，且保持原来染色体的二倍体数量和接触抑制行为，把这种传代细胞称为细胞株。8）克隆（clone）又称无性繁殖系或无性系，指由一个细胞或共同祖先通过有丝分裂所产生的遗传特性一致的细胞群或生物群，亦指DNA片段群

二、细胞培养的操作方式根据细胞培养时营养成分添加以及培养液与细胞收集方式的不同，细胞培养有：分批式、流加式、半连续式、连续式和灌流式5种操作方式。

3、半连续式培养半连续式培养又称重复分批式培养或换液培养在细胞增长和产物形成过程中，每隔一段时间从中取出部分培养液或者细胞，剩余的细胞作为种子，再用新的培养液补足到原体积，是反应期内的总体积不变。每次稀释培养体积的1/2~3/4。特点：（1）细胞可持续指数生长，并可保持产物和细胞在一较高的浓度水平，培养过程可延续很长时间。（2）可进行多次收获。（3）操作简便，生产效率高。

4、连续式培养连续式培养是在细胞达最大浓度以前，以一定速度向反应器连续添加新鲜培养液，同时含有细胞的培养液以相同速度连续从反应器流出，以保持培养体积恒定的培养方式。特点：（1）细胞能在恒定状态下生长，营养物质浓度、产物浓度、pH基本卡保持恒定细胞浓度以及生长速率可基本维持不变，细胞维持持续指数生长。（2）稳定状态可有效地延长分批培养中的对数生长期。

5、灌流式培养灌流式培养是指把细胞和培养基一起加入生物反应器后，在细胞增长和产物形成过程中，不断地取出部分培养液，同时又连续不断地补充新的培养液。与连续式操作的不知处在于取出培养液时，细胞均保留在生物反应器内。特点：（1）细胞截留系统可使细胞保留在生物反应器内，维持较高的细胞浓度。（2）能使细胞处在较稳定的营养环境中，有害代谢废物浓度积累较低。（3）反应速率容易控制，培养周期长，可提高生产效率，目标产品回收率高。（4）产品在反应器内停留时间短，可及时回收，有利于保护产品的活性。

三、细胞培养动力学细胞培养动力学（dynamicsof