CN102469769A 使用土壤杆菌对小麦属的植物进行基因导入的方法及小麦属的植物的转化植物的制作方法 （日本烟草产业株式会社）.docxVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利申请

(10)申请公布号CN102469769A

(43)申请公布日2012.05.23

(21)申请号201080033047.8

(22)申请日2010.07.29

(30)优先权数据

2009-1762422009.07.29JP

(85)PCT申请进入国家阶段日

2012.01.20

(86)PCT申请的申请数据

PCT/JP2010/0628312010.07.29

(87)PCT申请的公布数据

WO2011/013764JA2011.02.03

(71)申请人日本烟草产业株式会社地址日本东京都

(72)发明人石田佑二桶江井佑弘

(74)专利代理机构北京市柳沈律师事务所

11105

代理人沈雪

(51)Int.CI.

AO1H1/00(2006.01)

权利要求书2页说明书29页序列表4页附图2页

(54)发明名称

使用土壤杆菌对小麦属的植物进行基因导入的方法及小麦属的植物的转化植物的制作方法

(57)摘要

CN102469769A本发明的方法的特征是包含将接种了土壤杆菌的植物组织用共存培养基培养后，去除选自幼根、幼芽和胚轴中的至少一个部位的步骤。通过本发明，能够提供与传统公知的土壤杆菌法相比，以

CN102469769A

CN102469769A权利要求书1/2页

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1.一种对小麦属(Triticum)植物的未成熟胚或完全成熟种子的组织进行基因导入的方法，该方法包括：

(i)将接种了土壤杆菌的上述组织在该土壤杆菌的存在下进行培养的共存步骤；以及

(ii)与该共存步骤同时和/或在该共存步骤之后，在所述组织中物理地/化学地损伤选自幼根、幼芽和胚轴中的至少一个部位的步骤。

2.一种小麦属(Triticum)植物的转化植物的制作方法，该方法包括：

(i)将接种了土壤杆菌的未成熟胚或完全成熟种子的组织在该土壤杆菌的存在下进行培养的共存步骤；

(ii)与该共存步骤同时和/或在该共存步骤之后，在上述组织中物理地/化学地损伤选自幼根、幼芽和胚轴中的至少一个部位的步骤；

(iii)将上述组织用休眠培养基进行培养的休眠步骤；然后

(iv)将上述组织用再分化培养基进行再分化的步骤。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，在所述组织中物理地/化学地损伤选自幼根、幼芽和胚轴中的至少一个部位是从组织去除选自幼根、幼芽和胚轴中的至少一个部位。

4.根据权利要求1～3中任一项所述的方法，其中，与所述共存步骤同时和/或在该共存步骤开始后7天以内，在所述组织中物理地/化学地损伤选自幼根、幼芽和胚轴中的至少一个部位的步骤。

5.根据权利要求1～3中任一项所述的方法，其中，在所述共存步骤开始后1天～3天，在所述组织中物理地/化学地损伤选自幼根、幼芽和胚轴中的至少一个部位的步骤。

6.根据权利要求1～5中任一项所述的方法，其中，所述共存培养基是不含植物生长调节剂的培养基。

7.根据权利要求1～6中任一项所述的方法，其中，进行下述转化效率提高处理中的至少1项：

a)离心处理；

b)向共存培养基中添加硝酸银和/或硫酸铜；

c)热处理；

d)热和离心处理；

e)加压处理；

f)在粉末存在下接种土壤杆菌的处理；

g)在共存培养基中添加半胱氨酸的处理。

8.根据权利要求1～6中任一项所述的方法，其中，进行下述a)和/或b)的转化效率提高处理：

a)离心处理；

b)向共存培养基中添加硝酸银和/或硫酸铜。

9.根据权利要求2～8中任一项所述的方法，其中，上述(iii)休眠步骤和(iv)再分化步骤之间包括药物选择步骤。

10.根据权利要求2～9中任一项所述的方法，其中，(iii)休眠培养基和/或药物选择步骤的选择培养基包含植物生长调节剂。

11.根据权利要求1～10中任一项所述的方法，其中，所述土壤杆菌是选自LBA4404、

CN102469769A权利要求书2/2页

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EHA101、EHA105、AGL1C和58C1中的菌。

12.根据权利要求1～11中任一项所述的方法，其中，所述小麦属植物是普通小麦(T.aes