基因工程DNA文库的构建.pptVIP

第十一章DNA文库的构建和

目的基因的筛选;当前第2页\共有50页\编于星期五\7点;当前第3页\共有50页\编于星期五\7点;构建基因文库的基本程序：;第一节基因组DNA文库的构建;鸟枪法（霰弹法）：利用机械剪切力和超声波等物理方法或限制性核酸内切酶酶切等生化方法将生物chr.打断，随后通过T4DNA连接酶把这些片段与适当的质粒载体进行重组，转化受体菌后进行无性繁殖，获得一大群含不同外源DNA片段的克隆，再用简便的筛选方法从众多的转化菌株中筛选出含有某一目的基因的菌株，从中获得所要的基因。;代表性：指文库中所有克隆所携带的DNA片段重新组合起来可以覆盖整个基因组，即可以从该文库中分离任何一段DNA。代表性是衡量文库质量的一个很重要的指标。

文库构建策略：①采用部分酶切或随机切割的方法来消化染色体DNA，以保证克隆的随机性，保证每段DNA在文库中出现的频率均等；②提高文库所含基因组DNA的总容量，通常用覆盖基因组的倍数来衡量。;三、基因组DNA文库构建流程;当前第9页\共有50页\编于星期五\7点;1．基因组DNA文库的载体制备

载体的制备要求：①纯度高；②去磷酸化好。

2．高质量大分子量基因组DNA的提取和部分酶切

??提取的基因组DNA要求保存完整。

分子量越大，所得到的重组克隆的插入片段越大。