2024届高三生物一轮复习基因工程导学案.pdfVIP

2024年高考生物学一轮复习基因工程导学案

一、回归教材

学问点1、DNA重组技术的本工具

1、限制酶一一“分子手术刀”

Cb)上卜对称切割

黏性末端片段平木端片段

(1)特点：能够识别双链DNA分子特定的核甘酸序列,在特定位点切开两个脱氧核苜酸之间的磷酸二酯

地

(2)DNA末端：限制酶切割DNA产生.的DNA东端有两种形式：黏性末端、平末端。

2、D5IA连接酶一一“分子缝合针〃

(1)作用：将双链DNA片段“缝合〃起来，恢到被限制酶切开的两个核汁酸之间的磷酸二酯健。

(2)种类：①DNA连接酶：只能“缝合双链DNA互.补的黏性末端。

②LDNA连接酶：既可缝合双链DNA互补的黏性末端，又可缝合双链DNA的壬末端。

3、基因进入受体细胞的载体一一“分子运输车”

(1)载体种类

①质粒：一种暴露的结构简洁、于细菌拟核DNA之外，并具有自我复制的力量的豆报分子：

②人噬菌体的衍生物；③动植物病毒

(2)载体的特点

①能够在细胞内自我复制,或整合到染色体DNA上,随染色体DNA进行自我复制；②具有一个或多个限制

酶切点,便于供外源DNA插入；③具有特别的遗传标记基因,供重组DNA的鉴定和选择。

【留意】

(I)猎取目的基因和切割载体时一般使用两种不同的限制酶，目的是为了防止目的基因或载体的自环，

以及目的基因与载体的正确连接

(2)猎取一个目的基因需要限制酶切割两次，产生生个黏性末端或平末端。

(3)限制酶切位点的选择必需保证自动子、终止子和标记基因等的部位完整性,以便于检测。

4、与DNA有关的4种酶的比拟

比拟工程限制酶DNA连接酶耐高温DNA聚合酶解旋酶RNA聚合酶逆转录酶

作用底物DNA分子DNA片段脱氧核甘酸DNA分子核糖核甘酸脱氧核甘酸

作用部位磷酸二酯键磷酸二酯键磷酸二酯键氢键磷酸二酯键磷酸二酯键

形成产物黏性或平末端重组DNA新的DNA分子单链DNAmRNAcDNA

学问点2、基因工程的本操作步骤

第一步：目的基因的筛选与猎取

（I）利用PCR猎取和扩增目的基因：PCR聚（合酶链式反响）是利用DNA半保存复制的原理,在体外供应

参加DNA复制的各种组分与反响条件，对目的基因的核甘酸序列进大量复制的技术。

2（）人工合成：序列数据库、序列比对工具等的应用。

其次步：基因表达载体的构建核（心）

（1）表达载体的组成：目的基因、启动子、终止子、标记基因等。

2（）表达载体的功能；①使目的基因在受体细胞中稔定存在，并且遗传给下•代；②使目的基因能够表

达和发挥作用

3（）启动子：位于基因的首端，它是RNA聚合酶识别和结合的部位，驱动基因转录产生mR\合有时会在

载体中构建诱导型启动子，当诱导物存在时，可以激活或抑制目的基因的表达

4（）终止子：位于基因的尾端，使转录在所需要的地方停卜.来质粒

5（）标记基因：便于重:组DNA分子的筛选

6（）构建步骤

一股用同种或能产生相同末端的限制醛分别切割载体和含有

目的基因的DNA片段，再利用啦逸接展将目的基因片段拼

接到载体的切口处如（下图）。.

基因表达载体

第三步：将目的基因导入受体细胞

细胞类型方法操作步骤

农杆菌转化法将目的基因插入到Ti质粒的T-DNA上一一通过农杆