维生素B6发酵高产菌的构建及发酵工艺优化.pdfVIP

摘要

近年来，随着生活的发展，绿色化生产已经渐入人心。维生素B6是一种人体必需

营养物质，本研究就开发维生素B6的微生物细胞工厂以及优化发酵工艺进行一系列

的阐述与探讨。

利用实验室产维生素B6的大肠菌株LL1061进行发酵罐初步优化，得到了发酵罐

的培养基组分。检索了一些利用大肠杆菌生产其他化学品的发酵培养基，先后在摇瓶

水平和发酵罐水平上横向对比，确定了目前发酵培养基的优越性。

菌株ZT1在菌株LL1061的基础上，对过表达的基因pdxA和epd进行了一定程

度的改造，产量有一定的提升。研究了种子培养基中培养ZT1所需的参数，确定了温

度、原料补充方式、发酵罐大小、pH值和金属盐的参数，产量从250mg/L增加到1.26

g/L，约增加四倍。

为了更准确地筛选出影响发酵产量的因素，使用了包括转录组学和代谢组学在内

的组学技术。对全体遗传因子转录水平进行分析的结果显示，在发酵6小时到16小

时之间，306个遗传因子的转录水平发生了明显的变化，其中193个明显下调的基因

主要位于中心碳代谢及氨基酸合成的部分。利用UPLC-MS进行的非靶向代谢组学分

析结果显示，在发酵初期，部分氨基酸的含量以及TCA循环中部分有机酸的含量明

显减少。

为了缓解生产维生素B6的菌株的代谢压力，在基因组过表达pdxA和pdxJ的实

验室底盘菌株的基础上，对质粒上的epd和dxs进行筛选，并更换载体骨架，获得了

高产维生素B6的菌株ZT4。该菌株在摇瓶水平发酵48小时，能够生产410mg/L的吡

哆醇（PN），比对照增加了约13%。

通过菌株ZT4，对组学数据进行组合，探索温度，溶氧量，有机酸，氨基酸，C/N

等变量，溶氧量30%升高到40%，产量增加16.7%。另外，补充丁二酸使产量增加

了14.3%。最终将PN的产量提高到2g/L，这是目前大肠杆菌中报道的最高产量。

本研究以菌株构建及发酵优化为基础，成功获得了能高产维生素B6的大肠杆菌

菌株，并利用发酵工艺优化了生产条件，为能顺利实现维生素B6生物合成工业化提

供了技术基础。

关键词：维生素B；生物合成；大肠杆菌；发酵优化；补料分批发酵

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ABSTRACT

Inrecentyears,theconceptofgreenproductionhasgainedpopularity.Nochangesin

contenthavebeenmade.VitaminB6isanessentialnutrientforthehumanbody.Thisstudy

focusesonthedevelopmentofmicrobialcellfactoriesforvitaminB6andtheoptimizationof

thefermentationprocess.

ThefermenterwasinitiallyoptimizedusinglaboratoryvitaminB-producingE.coli

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strainLL1061,andthemediumcomponentswereobtained.Severalfermentationmedia

utilizingE.colifortheproductionofotherchemicalswerecomparedhorizontallyatthe

shakeflaskandfermenterlevelstodeterminethesuperiorityof