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转化子的筛选

——菌落PCR

DNA克隆的过程

获得目的DNA片断

(提取质粒DNA、PCR、酶切）

载体DNA与目的基因连接

转化受体细胞

筛选转化子

表达目的基因

连接反应后，可形成多种类型的DNA分子

1.不带外源DNA的载体自连分子

2.外源DNA彼此相连的多聚DNA分子

3.载体与外源DNA相连的分子

通过筛选鉴定：

1.有没有外源DNA

2.外源DNA的连接方式是否正确

重组子筛选方法

遗传检测法

物理检测法

菌落原位杂交法

免疫化学检测法

测序

菌落PCR

菌落PCR：是直接以转化菌的单个克隆为

模板,通过特异性引物或通用引物对插入载

体中的目的基因快速扩增，用于鉴定和筛

选阳性转化菌的技术。

与传统的鉴定方法相比,由于其具有快速、

经济、简便的特点而被广泛用于转化菌、

特别是大量转化子的鉴定和筛选。

操作步骤

在PCR管中加入PCRpre-Mix（已配好）

为平板上将要挑取的菌落标上号码（每组挑取8个