噬菌体T7 RNA聚合酶基因克隆与表达研究.pdfVIP

噬菌体T7RNA聚合酶的克隆与表达

(pBR322/lacUV5启动子/酶纯化/蛋白酶/定向转录)

PARICHEHREDAVANLOO*，ALANH.ROSENBERG，JOHNJ.DUNN，和F.WILLIAMSTUDIER†

生物系，布鲁克海文国家，纽约州乌普顿，11973

由理查德・B・塞特洛于提交

：噬菌体T7RNA聚合酶（T7I）的完整编码序列已在质粒pBR322中克隆。

当克隆从lacUV5启动子转录时，可以在大肠杆菌中积累大量活性酶。在纯化

过程中，一种显然可以切割蛋白质但不会使其的蛋白酶活性可能成为一个问

题，但描述了一种程序，可以获得高产率的几乎均一、高度活性的酶，适用于生

化和研究。T7RNA聚合酶对其自身的启动子具有严格的特异性，并会选择性

地转录已连接到此类启动子的。这种特异性使该酶既可用于体外生产特定

RNA，也可用于指导细胞内选定的表达。拥有克隆还使得对T7RNA聚合

酶功能进行详细的突变分析成为可能。

噬菌体T7RNA聚合酶（EC2.7.7.6）在T7早期产生，并在调控表达中发

挥作用（综述见参考文献1）。这种单链酶的分子量接近100