DNA的基本分子生物学操作.pptVIP

DNA的基本分子生物学操作演示文稿;DNA的基本分子生物学操作;如何研究某个基因的功能?;表达载体的构建;表达载体构建流程;/annotation/genome/neurospora/;查找基因;设计引物;一、PCR

（Phusion/Taq）;一、PCR;问题篇;二、乙醇沉淀DNA;三、酶切;25度的

50度的、60度的……;三、酶切;酶切反应体系

50μl体系5μl体系

buffer1/2/3/4/U:5μl0.5μl

DNA:xμlaμl

Enzyme:1.5~2μl0.3μl

ddH2O:补足

;反应的温度:

大多数酶的最适反应温度是37℃。

25℃酶：ApaISmaI

50℃酶：

反应时间:

（NEB快速酶切产品:5min）

一般2h。

若切末端的几个碱基，延长时间。

研究NEB产品目录！;三、酶切;双酶切

不同反应温度的酶不可以作双酶切。若两者buffer相同，先切低温酶，再