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《生化分离工程》思考题及答案试卷及答案

考试时间：______分钟总分：______分姓名：______

简答题

1.简述细胞破碎的主要方法及其适用范围。（10分）

2.比较双水相萃取与有机溶剂萃取在生物分离中的优缺点。（10分）

3.离子交换层析中，影响蛋白质吸附容量的关键因素有哪些？（10分）

4.解释膜分离过程中的浓差极化现象，并简述其控制方法。（10分）

论述题

1.论述亲和层析的原理及其在蛋白质纯化中的优势，并以His-tagged重组蛋白纯化为例，详细说明亲和层析的操作流程及关键参数控制。（15分）

2.某生物制药企业需从发酵液中分离纯化一种热稳定性较好的酶（分子量50kDa，等电点pI=5.2），请设计下游分离工艺流程，并说明各步骤的目的、可选方法及选择理由。（15分）

计算题

1.某蛋白质溶液（初始体积2L，浓度10mg/mL）采用超滤膜（截留分子量10kDa）进行浓缩，要求浓缩至50mg/mL。已知超滤膜通量为50L/(m2·h)，操作压力0.3MPa，温度25℃。若忽略浓差极化影响，计算所需的超滤膜面积及浓缩时间。（10分）

2.采用离子交换层析分离两种蛋白质A（pI=6.0）和B（pI=8.5），层析介质为强阳离子交换剂（交换基团为-SO??）。若洗脱液为pH7.0的磷酸盐缓冲液，请