碱性磷酸酶Km值的.ppt

碱性磷酸酶Km值的测定

底物浓度

酶浓度

pH

温度

激活剂

抑制剂

※研究一种因素的影响时，其余各因素均恒定。

影响酶促反应的因素

底物浓度对反应速率影响

在其他因素不变的情况下，底物浓度对反应速率的影响呈矩形双曲线关系。

[S]：底物浓度

V：不同[S]时的反应初速度

Vmax：最大反应速度(maximumvelocity)

Ｋm：米氏常数(Michaelisconstant)

Km值

①Km等于酶促反应速度为最大反应速度一半时的底物浓度。

②意义：

a)Km是酶的特征性常数之一；

b)Km可近似表示酶对底物的亲和力；

c)同一酶对于不同底物有不同的Km值。

Km

Km＝[S]

Vmax

V

[S]

Km

Vmax/2

双倒数作图法

Ｋm值与Ｖmax值的测定

注意事项

1底物和酶取样准确

2保温时间准确

1

2

3

4

5

6

7

加入酶的时间

加入碱性溶液

终止反应的

时间

9:00:00

9:00:30

9:01:30

9:02:00

9:02:30

9:03:00

9:01:00

9:15:00

9:15:30

9:16:00

9:16:30

9:17:00

9:17:30

9:18:00

保证每个试管的反应时间为15分钟

实验报告

1绘制矩形双曲线图

2绘制双倒数图，并通过双倒数图读出碱性磷酸酶对磷酸