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2025年基因工程与生物制品手册

第1章基因工程基础与分子生物学原理

1.1基因编辑技术与CRISPR-Cas9机制解析

CRISPR-Cas9系统由向导RNA（gRNA）和核酸内切酶Cas9核心蛋白组成，其核心机制是利用gRNA识别并切割特定的DNA序列，从而实现对基因组的精准编辑。在实验操作中，需将gRNA的5端与目标基因位点（如启动子或基因编码区）精确配对，确保切割位点准确无误，通常要求gRNA序列与目标位点完全互补，且避免在PAM序列（通常位于NGG中）附近发生非特异性切割。Cas9蛋白具有典型的二聚体结构，由两个对称的催化亚基组成，