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2025年基因编辑技术原理与应用手册

第1章基因编辑技术基础原理与核心机制

1.1同源重组修复（HR）与非同源末端连接（NHEJ）机制解析

同源重组修复（HR）是一种高保真的基因组修复机制，依赖于DNA双链断裂后利用同源模板进行精确修复的过程。在细胞修复过程中，断裂位点会形成3单链悬突，这些单链片段必须与一条同源序列（通常是姐妹染色单体上的DNA）配对。当HR成功发生时，细胞会合成新的DNA链，将同源模板序列整合到断裂点，从而恢复完整的基因结构。这一过程能够精确地纠正点突变或缺失，是维持基因组稳定性的关键防线，其效率通常高于NHEJ。

相比之下，非同源末端连接（NHEJ）是一种快速但低保真的修复途径，它不依赖任何同源模板，直接将断裂的双链末端连接在一起。NHEJ会导致插入或缺失（Indels），从而引起基因剪接错误或完全失活。在基因编辑应用中，NHEJ常被利用来敲除特定基因，因为其产生的随机Indels往往足以导致目标基因功能的丧失，且操作简便、成本低廉。这对于构建基因敲除动物模型或筛选致死突变体至关重要。从分子机制上看，NHEJ涉及核酸酶切除5端或3端，随后连接酶直接将末端连接，这一过程往往伴随着微缺失或小插入，其发生的随机性使得编辑结果难以预测。

结合实验数据，NHEJ在人类细胞系中的效率可达10%至40%，而在哺乳动