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生物医药研究与生产手册（执行版）

第1章实验室研究与验证

1.1细胞与组织培养基础规范

所有细胞培养操作必须在生物安全三级（BSL-3）实验室或更高等级环境中进行，严禁在普通生物安全实验室或普通实验室开展涉及高致病性病原微生物（如狂犬病毒、埃博拉病毒等）的活体细胞实验。实验人员需佩戴双层防护手套（内层丁腈手套，外层乳胶手套），并穿戴一次性防护服、护目镜及口罩，防止气溶胶传播。进入实验区前，须对双手进行酒精擦拭消毒，并记录在《生物安全操作日志》中。

细胞传代需使用无菌移液器（无针头）和无菌移液枪头，严禁使用一次性针头，以防针头尖端污染导致细胞污染或感染。移液操作应遵循“吸-推-吸”原则，避免液体溅出。培养瓶/皿及移液枪头必须经过100%过滤除菌处理，并置于4℃冰箱保存，使用前需再次检查滤膜是否完好（无破损、无气泡），若发现破损需立即更换。培养基配制需严格遵循无菌操作，所有耗材（如移液枪头、吸头）必须经过巴氏灭菌或过滤除菌处理，并在有效期内使用，严禁使用过期培养基。

细胞传代密度需根据细胞系特性严格控制，通常以细胞贴壁后覆盖培养瓶表面70%-90%为宜，过密易导致传代困难且增加感染风险，过稀则影响细胞活力。

1.2细胞系筛选与验证方法

细胞系筛选通常采用流式细胞术结合免疫荧光染色，通过检测细胞表面标志物（如CD34、CD45、CD117等）