第2节　基因工程的基本操作程序.pptxVIP

第2节基因工程的基本操作程序;素养·目标定位;素养·目标定位;知识概览;一、目的基因的筛选与获取

1.目的基因:

在基因工程的设计和操作中,用于改变受体细胞性状或获得预期表达产物等的基因,主要是指编码蛋白质的基因。?

2.筛选合适的目的基因:

从相关的已知结构和功能清晰的基因中进行筛选是较为有效的方法之一。?;3.利用PCR获取和扩增目的基因

(1)原理:根据DNA半保留复制的原理,在体外提供参与DNA复制的各种组分与反应条件,对目的基因的核苷酸序列进行大量复制。?

(2)组分和条件:缓冲液、DNA模板、2种引物、4种脱氧核苷酸和耐高温的DNA聚合酶,同时控制温度。;(3)过程

①变性:当温度超过90℃时,双链DNA解聚为单链。

②复性:当温度下降到50℃左右时,两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合。?

③延伸:当温度上升到72℃左右时,溶液中的4种脱氧核苷酸在耐高温的DNA聚合酶的作用下,根据碱基互补配对原则合成新的DNA链。?

如此重复循环多次。

(4)特点:成指数形式扩增。?;4.在获得转基因产品的过程中,还可以通过构建基因文库来获取目的基因。?

微点拨用PCR技术扩增DNA不需要解旋酶;PCR技术需要的DNA聚合酶能耐高温,具有热稳定性。;二、基因表达载体的构建

1.构建目的

(1)让目