2025年医药行业研发部药剂师药品研发流程手册.docxVIP

2025年医药行业研发部药剂师药品研发流程手册

第1章药物发现与先导化合物筛选

第一节靶点验证与生物信息学分析

1.1靶点验证与生物信息学分析

首先利用多组学数据（基因组、转录组、蛋白组）对候选靶点进行功能验证，通过CRISPR-Cas9基因编辑技术敲除或过表达目标蛋白，利用WesternBlot、免疫荧光或流式细胞术检测细胞内蛋白表达量变化，若靶点敲除后细胞增殖率显著下降或凋亡率上升，则确证靶点功能有效性。结合线粒体复合物I、NADPH氧化酶及细胞色素c释放等经典指标，测定靶点抑制剂对细胞线粒体功能的抑制作用，若细胞线粒体膜电位（Δψm）显著降低且线粒体形态发生肿胀，可进一步确认靶点位于细胞能量代谢的关键环节。

应用ChIP-seq技术检测靶点蛋白在特定细胞状态下的结合图谱，若ChIP峰与转录组数据高度吻合，表明靶点蛋白确实调控了特定基因的表达，从而将候选靶点锁定为有效的药物作用位点。利用分子对接软件（如AutoDockVina）模拟小分子抑制剂与靶点蛋白活性位点的结合模式，若结合模式显示抑制剂占据了关键疏水口袋且氢键网络完整，则初步预测该小分子具有抑制靶点配体结合的能力。通过计算分子动力学模拟（如MD模拟），观察抑制剂在靶点蛋白表面的结合稳定性，若结合能（ΔG）低于-10kcal/mol且构象变化较小，说明抑制剂与