2025年上学期高三生物单克隆抗体制备流程图分析试题.docVIP

2025年上学期高三生物单克隆抗体制备流程图分析试题

一、流程图核心步骤解析

（一）免疫动物与B淋巴细胞获取

单克隆抗体制备的起始阶段需对实验动物进行特异性免疫。以抗细菌X单克隆抗体制备为例，需多次向小鼠腹腔注射纯化的细菌X抗原，每次免疫间隔2-3周以增强免疫应答。末次免疫后第3天，从脾脏中分离得到已免疫的B淋巴细胞，该细胞具有合成并分泌针对细菌X的特异性抗体的能力，但在体外培养条件下仅能存活10-14天，无法持续增殖。

（二）骨髓瘤细胞的培养与筛选

选择SP2/0骨髓瘤细胞作为融合伴侣，其特性为：①在体外培养时可无限增殖；②缺乏次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶（HGPRT?），无法在HAT选择培养基中存活。培养过程中需维持37℃、5%CO?的恒温培养箱环境，使用含10%胎牛血清的DMEM培养基，每2-3天更换一次培养液，确保细胞密度处于对数生长期（1×10?-1×10?个/mL）。

（三）细胞融合与杂交瘤细胞构建

融合诱导：采用50%聚乙二醇（PEG4000）作为融合剂，按1:1比例混合B淋巴细胞与骨髓瘤细胞（总数约1×10?个），在37℃水浴中处理90秒后，缓慢加入预热的无血清培养基终止反应。融合过程利用了细胞膜的流动性原理，可能形成的细胞类型包括：未融合的B淋巴细胞、未融合的骨髓瘤细胞、B-B融合细胞、骨髓瘤-骨髓瘤融合细胞以及B淋巴细胞-骨髓瘤融合细胞（即杂交瘤细胞）。

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