基因编辑脱靶效应检测方法的建立与评估_基因编辑与递送系统.docxVIP

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《基因编辑脱靶效应检测方法的建立与评估》

第一章绪论

1.1实验背景

1.1.1研究领域现状

近年来，以CRISPR/Cas9为代表的基因编辑技术在生命科学领域引发了革命性的变革，其通过RNA导向实现对靶基因的定点修饰，广泛应用于基因功能研究、疾病模型构建及基因治疗等领域。

随着基因编辑技术的不断成熟，递送系统作为连接体外操作与体内应用的关键桥梁，也在飞速发展，从传统的病毒载体到非病毒载体如脂质纳米颗粒（LNP），递送效率与安全性均有显著提升。

然而，CRISPR/Cas9系统在发挥高效编辑作用的同时，其脱靶效应始终是制约其临床应用的关键瓶颈。

脱靶效应是指Cas9蛋白在非预期的基因组位点进行切割，可能导致基因突变、染色体异常甚至癌变，这给基因治疗的安全性带来了巨大的不确定性。

尽管高保真Cas9变体不断涌现，但如何精准、全面地检测脱靶位点，仍是领域内亟待解决的核心问题。

现有的检测方法如预测软件、体外切割等存在假阳性率高或覆盖度不足的问题，难以满足临床级安全性评估的需求。

因此，建立一种基于全基因组测序的高灵敏度、高通量的脱靶检测方法，对于系统评估CRISPR系统的安全性具有重要的现实意义。

1.1.2实验问题提出

在基因编辑的实际应用中，脱靶效应的来源复杂多样，主要表现为gRNA序列与非靶标序列存在非特异性结合，尤其是在存在碱基错配或基因组结构变异的情