核酸杂交医学知识课件.pptVIP

第一节核酸分子杂交的基本原理

第二节核酸探针

第三节核酸分子杂交技术;第一节???核酸分子杂交的基本原理

DNA和DNA链、RNA与DNA链或两条RNA链之间，只要具有一定的互补序列均可在适当的条件下发生杂交。常用已知的DNA或RNA的片段作为探针，包括特异的DNA序列，或转录的RNA序列或cDNA序列，或人工合成的寡核苷酸片段。

根据支持物的不同，分为固相杂交和液相杂交。固相杂交又包括膜上印迹杂交和细胞原位杂交两种。膜上印迹杂交即将核酸从细胞中分离纯化后，在体外与探针杂交，细胞原位杂交是在细胞内进行的杂交。;第二节核酸探针

核酸探针是指带有放射性同位素、生物素或其他活性物质标记的某种特定的DNA或RNA片段。

一、核酸探针的类型

㈠基因组DNA探针

用克隆化的基因片段作探针应尽可能选用基因的编码序列(外显子)。

㈡cDNA探针

与mRNA互补的DNA链称cDNA，特异性高，是一种较理想的核酸探针。;㈢RNA探针

RNA探针有下述优点：

①杂交体的稳定性高，杂交反应条件严格，特异性更高。

②RNA单链不存在双链DNA探针的互补双链的复性，杂交效率较高。

③RNA无高度重复序列，非特异杂交少。

④杂交后用RNase消化未杂交的RNA探针，可降低杂交本底。

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