蛋白-蛋白GST-Pulldown实验：验证两蛋白相互作用.pdfVIP

GST‑pulldown实验

1.实验原理

利用重组技术将目标蛋白与GST（谷胱甘肽S转移酶）融合，融合蛋白通过GST与

固相化在载体上的GSH（谷胱甘肽）亲和结合。因此，当与融合蛋白有相互作用的蛋白通

过层析柱时或与此固相复合物混合时，就可被吸附而分离。分离所得的蛋白再进行

Westernblotting，即可检测与目标蛋白有相互作用的蛋白。

例如，验证蛋白质A和蛋白质B的相互结合作用。需要构建A（或B，即A、B选一

个即可）与GST融合的重组质粒，然后通过pulldown，把表达出来的GST‑A融合蛋白

拉下来（同时与A有相互结合作用的蛋白也会被拉下来），通过Westernblotting，用

B抗体检测拉下来的蛋白，就能确定这些被拉下来的蛋白里是否有B，如果有表明，A、

B存在相互结合作用。

2.实验目的

体外验证蛋白质A与蛋白质B的相作用，用于验证两个已知蛋白的相互作用。

互

3.实验材料

3.1主要试剂

谷胱甘肽琼脂糖珠、细胞裂解、细胞裂解等。

3.2主要仪器

摇床、离心机等。解螺旋

4.实验步骤

4.1构建GST融合目的蛋白A重组质粒(质粒