高考生物一轮复习（人教版） 第10单元 解惑练4 PCR技术拓展应用.pdfVIP

解惑练4PCR技术拓展应用

应用1：反向PCR测定未知DNA区域

当DNA的某些序列已知，而需要扩增已知序列两端的未知序列时，可采用反向PCR技

术。理：用限制性内切核酸的切割该DNA,随后使用DNA连接的将获得的酶切产物环化,

这样就获得了已知序列两侧携带有未知序列的环状DNA分子。以该已知序列为模板设计一

对相反方向的特异性引物，该引物对已知序列反向，但对未知序列却是相向的，从而得以扩

增出未知序列。

应用2：PCR定点突变技术

该技术要使用四条引物。其中引物2和3的突起处代表与模板链不能互补的突变位点，

而这两条引物有部分碱基包（括突变位点）是可以互补的。因此，分别利用引物I和2,引物3

和4进行PCR后，得到的DNA片段可以通过引物2和3互补的碱基杂交在一起，再在DNA

聚合酶的作用下延伸，就能成为一条完整的DNA片段。最后，用引物1和4进行扩增得到

含有突变位点的DNA片段。通过测序可以检验定点突变是否成功。