宏基因组二代测序技术在血液病患者感染病原诊断中的应用专家共识 (1).pptx

宏基因组二代测序技术在血液病患者感染病原诊断中的应用专家共识

目录02临床诊断应用01技术基础与原理03专家共识要点04实施挑战与对策05临床验证与证据06未来展望与建议

01PART技术基础与原理

从临床样本中提取所有微生物及宿主的DNA/RNA，需采用高效裂解方法破除微生物细胞壁（如革兰阳性菌的肽聚糖层），同时通过去宿主技术降低人源核酸干扰，提高病原体检出率。010203mNGS技术核心流程核酸提取将提取的核酸片段化后，连接测序接头并进行PCR扩增，形成标准化测序文库。针对RNA病毒需先逆转录为cDNA，文库制备需避免交叉污染并严格质量控制。文库构建采用边合成边测序技术（如Illumina平台），通过荧光信号采集实现短读长（通常75-150bp）大规模并行测序，单次运行可产生数GB至TB级数据量，覆盖数千种病原体基因组信息。高通量测序

建议在寒战或发热初期采集外周血，成人至少5mL（儿童2-3mL），避免使用含EDTA抗凝剂管以防抑制后续PCR反应，优先选用血培养阴性样本以减少背景干扰。采样时机与体积若无法立即提取，DNA样本应于-80℃保存（避免反复冻融），RNA样本需加入RNA稳定剂并在24小时内处理，防止核酸降解影响检出灵敏度。核酸稳定保存采用差速离心法分离血浆与血细胞，血浆样本需通过0.45μm滤膜去除宿主细胞碎片；对血细胞层可采用溶红细胞缓冲液处理，保留细胞内病原体