PCR技术分离目的基因.pptxVIP

;KaryB.Mullis（1944－）;;TaqDNA聚合酶（thermusaquaticus);;3PCR反应体系的组成;;PCR引物的设计原则:

1.引物的特异性

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引物与非特异扩增序列的同源性不要超过70%或有连续8个互补碱基同源。

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2.长度

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寡核苷酸引物长度为15~30bp。

3.G+C含量

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G+C含量一般为40%~60%。其Tm值是寡核苷酸的解链温度，即在一定盐浓度条件下，50%寡核苷酸双链解链的温度。Tm值最好接近72℃以使复性条件最佳。

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;4.碱基础随机分布

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引物中四种碱基的分布最好是随机的，不要有聚嘌呤或聚嘧啶的存在。尤其3′端不应超过3个连续的G或C，因这样会使引物在G+C富集序列区错误引发。

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5.引物自身

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引物自身不应存在互补序列，否则引物自身会折叠成发夹状结构牙引物本身复性。这种二级结构会因空间位阻而影响引物与模板的复性结合。若用人工判断，引物自身连续互补碱基不能大于3bp。

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逆转录PCR(RT-PCR)

将mRNA逆转录与PCR技术相偶联的一种基因分离技术。

;ＲＴ－ＰＣＲ;RACE（RapidamplificationofcDNAends）

cDNA末端的快速扩增技术，是以mRNA为模板合成cDNA第一条链后用PCR技术扩增出某个特异位点到3’或5’端之间未知序列的方法。

;5’-RAC