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第八章基因文库构建与目标基因取得

基因文库(genelibrary)是指某种生物、组织、或细胞全部DNA片段克隆群体。包含基因组文库(genomiclibray)和cDNA文库(cDNAlibrary)。

第一节基因组文库构建

一、理想基因组文库应具备条件

1、代表性高，要包含基因组全部DNA序列；

2、克隆数不宜过大，以减轻文库筛选工作量；

N=ln(1-P)/ln(1-f)N:文库克隆数;P:筛选目标序列概率;

f:插入片段与基因组大小比值

3、载体克隆容量要大于基因长度，防止基因被分割克隆；

4、克隆之间必须存在足够长度重合区域以利确定克隆之

间关系。;二、用于构建基因组文库载体;2、黏粒载体;3、酵母人工染色体载体;三、基因组文库构建程序

1、基因组DNA克隆片段制备

①高分子量基因组DNA提取

②DNA克隆片段制备;3、基因组DNA片段与载体连接(重组DNA分子构建)

连接效率主要受插入片段与载体摩尔数比以及DNA片段总浓度影响。所以，应经过连接预试验确定连接反应中载体臂和插入片段用量。;4、重组DNA分子导入受体细胞

对于λ噬菌体载体、黏粒载体，重组DNA分子在体外包装成噬菌体颗粒，以噬菌体感