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生物制药技术与产业发展手册（执行版）

第1章生物制药技术基础与法规框架

1.1生物制药核心工艺原理解析

结晶过程是生物制药中获取高纯度目标蛋白的关键步骤，其核心原理是利用目标蛋白在不同溶剂中溶解度的差异进行分离。在溶解度曲线图中，X轴代表温度，Y轴代表浓度，当温度降低或浓度增加时，蛋白溶解度下降，从而析出结晶。例如，在重组人胰岛素生产中，需将发酵液浓缩至12g/100mL，再缓慢降温至37℃以下，利用其在37℃以下溶解度急剧下降的特性，诱导形成糖衣结晶，随后通过离心去除结晶，实现初步纯化。层析纯化技术利用生物大分子在特定介质上的吸附与解吸差异进行分离，其机理包括离子交换、疏水相互作用、亲和层析和凝胶过滤。以亲和层析为例，利用抗体与抗原特异性结合的原理，将含有目标蛋白的洗脱液通过包被了相应抗原的树脂柱，目标蛋白被特异性吸附，杂质蛋白则随流动相流出，从而获得高纯度蛋白。

膜分离技术利用半透膜的选择透过性，通过超滤、超离心或纳滤等机制实现生物制剂的浓缩、脱盐和小分子杂质的去除。在脱盐步骤中，常采用30kDa截留分子量（MWCO）的纳滤膜，在pH7.4的缓冲液中，目标蛋白因分子量大于膜孔径被截留，而小分子盐分和小分子杂质则透过膜被去除，实现“脱盐”功能。酶法纯化是一种温和且高效的生物制药技术，利用特异性蛋白酶或核酸酶降解蛋白中的特定杂质或去除糖蛋白上的糖