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生物技术与生物医药开发手册（执行版）

第一章细胞培养与扩增技术

第一节动物细胞复苏与传代

细胞复苏是细胞培养循环的起点，旨在将长期冻存的细胞重新激活并恢复其生理活性。操作前必须严格检查冻存管是否完好无损，避免玻璃碎片污染；取出冻存管时动作要轻，防止管壁破裂导致细胞内容物泄漏。复苏过程需遵循“室温解冻、避光操作、轻柔吸移”的原则。将冻存管置于37℃培养箱中，通过水浴或隔水加热法缓慢升温，切忌直接置于室温或沸水中，以免细胞外膜破裂导致细胞内容物外泄。

解冻完成后，立即使用无菌移液枪头吸取少量细胞悬液，通过细胞悬液过滤器（如0.45μm或0.22μm滤膜）过滤，去除可能存在的细菌、真菌及大分子杂质，确保细胞纯度。将过滤后的细胞悬液接种至新配制的培养基中，接种密度通常根据细胞类型调整，一般以1×10^6个/mL至5×10^6个/mL为宜，具体需参考细胞说明书。接种后轻轻颠倒培养瓶或摇动培养箱，使细胞与培养基充分混合均匀，避免局部浓度过高导致细胞贴壁或死亡；接种量不宜过大，以免增加氧化应激风险。

复苏后的细胞活力检测是判断复苏成功的金标准，通常采用CCK-8法或台盼蓝染色法，若存活率低于90%则需重新冻存或调整复苏参数。

第二节细胞贴壁与悬浮培养

贴壁细胞（如HEK293、原代细胞）需经历贴壁诱导期，即接种后24-48小时，细胞开