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免疫组化染色实验报告

一、实验材料与仪器

（一）实验样本

本次实验选取的样本为人肺癌组织石蜡切片，共20例，均来自某三甲医院胸外科2024年1月至2025年12月手术切除标本。样本经10%中性福尔马林固定、梯度乙醇脱水、二甲苯透明、石蜡包埋后，制成4μm厚的连续切片，贴于经多聚赖氨酸处理的载玻片上，60℃烤箱烘烤2小时后备用。所有样本采集均获得患者知情同意，并通过医院伦理委员会审批。

（二）主要试剂

一抗：兔抗人细胞角蛋白19（CK19）单克隆抗体（稀释比例1:200，品牌：CST，货号：4573S）、鼠抗人上皮细胞膜抗原（EMA）单克隆抗体（稀释比例1:150，品牌：Abcam，货号：ab71916）、兔抗人Ki-67单克隆抗体（稀释比例1:300，品牌：CellSignalingTechnology，货号：9449S），均为即用型抗体，4℃保存。

二抗：羊抗兔IgG-HRP（辣根过氧化物酶标记）、羊抗鼠IgG-HRP（稀释比例均为1:500，品牌：中杉金桥，货号：PV-9001、PV-9002），现用现配。

显色系统：DAB（3,3-二氨基联苯胺）显色试剂盒（品牌：北京中杉金桥，货号：ZLI-9018），包含DAB显色液A液和B液，使用时按1:100比例混合。

其他试剂：柠檬酸盐抗原修复液（pH6.0）、PBS缓冲液（pH7.4）、无水乙醇、二甲苯、苏木精染液、盐酸分化液、