实时荧光定量PCR技术解析与应用探究.pptVIP

实时荧光定量PCR原理及应用;实时荧光定量PCR的基本原理

;在实时荧光定量PCR反应中，引入了一种荧光化学物质，伴随PCR反应的进行，PCR反应产物不断合计，荧光信号强度也等百分比增长。每经过一种循环，搜集一种荧光强度信号，这么我们就能够通过荧光强度变化监测产物量的变化，从而得到一条荧光扩增曲线图.;;荧光背景信号阶段：为扩增最初的10～15个循环，扩增的荧光信号被荧光背景信号所掩盖，我们无法判断产物量的变化。

平台期：扩增产物已不再呈指数级的增长。PCR的终产物量与起始模板量之间没有线性关系，所以依据最后的PCR产物量不能计算出起始DNA拷贝数。;;荧光阈值：是在荧光扩增曲线上人为设定的一种值，它能够设定在荧光信号指数扩增阶段任意位置上，但普通我们将荧光域值的缺省设置是3-15个循环的荧光信号的标准偏差的10倍。

CT值：每个反应管内的荧光信号到达设定的域值时所经历的循环数被称为CT值。;CT值与起始模板的关系研究表明，每个模板的CT值与该模板的起始拷贝数的对数存在线性关系，起始拷贝数越多，到达荧光阈值的CT值越小，反之越大。;;定量方法;;其它定量方法;荧光定量PCR检测模式;检测模式;

在PCR反应体系中，加入过量SYBR荧光染料，SYBR荧光