荧光定量PCR检测项目.pptVIP

荧光定量PCR检测项目HBV-DNA定量乙肝基因分型乙肝拉米夫定耐药HCV-RNA定量病毒性脑炎

实时荧光定量PCR方法------TaqMan法

方法：TaqMan法TaqMan---水解型杂交探针与目标序列互补5′端标记有荧光报告基团(Reporter,R)，如FAM、VIC等3′端标记有荧光淬灭基团(Quencher,Q)探针完整，R所发射的荧光能量被Q基团吸收，无荧光，R与Q分开，发荧光Taq酶有5′→3′外切核酸酶活性，可水解探针

5’3’5’5’3’5’ForwardPrimerReversePrimerTaqMan?ProbeRQTaqman实时PCR的反应过程

Displacement5’3’5’5’3’5’ForwardPrimerReversePrimerRQ

Hydrolysis5’3’5’5’3’5’QR

PolymerizationCompleted5’3’5’5’3’5’RQ每扩增一条DNA分子，释放一个荧光信号，可以在循环过程中任一点检测荧光

实时荧光定量PCR定义在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号累积实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法

实时荧光定量PCR原理实时原理常规PCR技术：对PCR扩增反应的终点产物进行定量和定性分析无法对起始模板准确定量，无法对扩