基因分析技术简介.pptVIP

陶慧卿基因分析技术简介1

在生物、医学、农牧业领域的应用2

测序的应用基因组DNA测序cDNA测序未知序列测序已知序列再测序3

双脱氧链终止法的原理Sanger双脱氧链终止法的最大特点是引入了双脱氧核苷三磷酸（2ˊ,3ˊ-ddNTP）作为链终止剂。ddNTP可以在DNA聚合酶的作用下和多核苷酸链的3ˊ羟基形成磷酸二酯键，但却不能再与下一个核苷酸缩合，结果使得多核苷酸链的延伸终止。4

双脱氧链终止法测序的主要步骤扩增待测DNA片段，使其变性，获得单链DNA模板。选择一条与DNA单链互补的短链引物，将引物用放射性同位素标记。引物先同单链模板复性。在四个反应管中分别加入待测DNA单链模板、互补引物分子、四种的dNTP、DNA聚合酶(Klenow酶)以及不同的ddNTP进行聚合反应。5

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双脱氧链终止法测序与PCR的区别?测序只用一条引物，PCR需要两条引物?测序产物线性增长，PCR产物指数增长?测序需要dNTP和ddNTP，PCR只用dNTP?测序产物是一系列长度相差一个碱基的片段，PCR产物只有一条带7

1、商品化测序试剂盒-荧光染料标记ABIPRISMBigDyev3.1和v1.1试剂盒2、自动化测序仪ABIPRISM310、3100和3730全自动遗传分析仪