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凝胶过滤层析测分子量实验报告

一、实验原理

凝胶过滤层析（GelFiltrationChromatography，GFC），又称为分子筛层析，是一种利用多孔凝胶介质的分子筛效应分离不同分子量物质的液相层析技术。其核心原理基于凝胶颗粒内部存在大量孔径均一的微孔，当含有不同分子量组分的混合溶液流经凝胶层析柱时，各组分在柱内的运动路径存在显著差异：

分子量大于凝胶微孔孔径的大分子物质，无法进入凝胶颗粒内部，只能沿着凝胶颗粒之间的空隙随流动相向下移动，流经的路径短，洗脱体积（Ve）小，会最先被洗脱出来。

分子量小于凝胶微孔孔径的小分子物质，可自由扩散进入凝胶颗粒内部，在柱内的运动路径长，洗脱体积大，会较晚被洗脱出来。

分子量介于两者之间的物质，部分可进入凝胶微孔，洗脱体积则介于大分子和小分子之间。

在一定范围内，物质的洗脱体积（Ve）与分子量（Mw）的对数呈线性关系，可通过公式表示为：Ve=K1-K2×lgMw，其中K1和K2为常数，与层析柱参数、凝胶类型及实验条件有关。通过测定已知分子量标准蛋白的洗脱体积，绘制Ve-lgMw标准曲线，再测定未知蛋白的洗脱体积，即可从标准曲线中计算出未知蛋白的分子量。

此外，分配系数（Kav）也是凝胶过滤层析中的重要参数，其计算公式为：Kav=(Ve-Vo)/(Vt-Vo)，其中Vo为外水体积（凝胶颗粒之间的空隙体积，可通过测定完全