分子生物学实验原理与常见问题解答.pptVIP

（优选）分子生物学实验原理与常见问题解答;商品化提取试剂盒原理：;杜绝外源酶的污染：

严格戴好帽子，口罩，手套。

实验所涉及的离心管，Tip头，移液器杆，电泳槽，实验台面等要彻底处理。

实验所涉及的试剂/溶液，尤其是水，必须确保RNase-Free。;阻止内源酶的活性：

选择合适的匀浆方法。

选择合适的裂解液。

控制好样品的起始量。;RNA提取原理与注意事项

;PCR技术的基本原理;引物的复性温度

通过以下公式帮助选择合适的温度：;;模板DNA;;;;;;;标准的PCR反应体系（100ul体系）;PCR反应五要素;（1）模板

单、双链DNA均可。

不能混有蛋白酶、核酸酶、DNA聚合酶抑制剂、DNA结合蛋白类。

一般100ngDNA模板/100?L。

模板浓度过高会导致反应的非特异性增加。;（2）引物浓度

0.1-0.5?mol/L

浓度过高易导致模板与引物错配,反应特异性下降。

（3）TaqDNA聚合酶

0.5-2.5U/50?l

酶量增加使反应特异性下降;酶量过少影响反应产量。;（4）dNTP

dNTP浓度取决于扩增片段的长度

四种dNTP浓度应相等

浓度过高易产生错误碱基的掺入，浓度过低则降低反应产量

dNTP可与Mg2+结合，使游离的Mg2+浓度下降，影响DNA