蛋白质与蛋白质相互作用研究方法加实例.ppt

蛋白质与蛋白质相互作用研究方法加实例演示文稿;优选蛋白质与蛋白质相互作用研究方法加实例;酵母双杂交系统;1.1酵母双杂交技术的原理

酵母双杂交系统由Fields和Song等首先在研究真核基因转录调控中建立。他的产生是基于对酵母转录因子GAL4性质的研究.

基因转录不仅需要有特定的DNA顺式序列结构，而且也需要有反式转录激活因子的参与。转录激活因子往往由两个或两个以上相互独立的结构域构成,其中有DNA结合结构域(DNAbindingdomain,DB)和转录激活结构域(activationdomain,AD),它们都是转录激活因子发挥功能所必需的。

单独的BD或AD都不能激活基因转录，但不同转录激活因子的DB和AD形成的杂合蛋白仍然具有正常的激活转录的功能。;如果要研究两个蛋白之间有无相互作用，可以把这两

个蛋白分别与DB和AD形成的融合蛋白。

与DB融合的蛋白称为“诱饵”(bait)，

与AD融合的蛋白称为“猎物”(prey)。

如果这两个蛋白能发生相互作用,这两个融合蛋白上的

DB和AD就能重新形成有活性的转录激活因子,从而激活

报告基因(reportergene)的转录与表达。

通过检测报告基因的表达产物,可判别“诱