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治疗性蛋白药物研究技术指导原则（试行）

一、范围

本指导原则针对通过生物技术方法制备，用于预防、治疗、诊断人类疾病的蛋白质类药物，包括重组治疗性蛋白、天然提取获得的治疗性蛋白等非抗体类、非融合蛋白类治疗性蛋白，涵盖研究开发的药学研究、非临床研究、临床研究全流程关键技术要求，供研究开发、注册申报参考。随着技术进步与认知提升，本指导原则将适时修订更新。

二、药学研究

（一）结构与理化性质确证

治疗性蛋白的一级结构、高级结构、理化性质必须明确，需通过多维度分析完成确证：

1.一级结构：采用高分辨质谱测定精确分子量，肽图分析覆盖率需达到100%，结合N端测序、C端测序确认氨基酸序列准确性，确认是否存在氨基酸突变、翻译后修饰异常。对于糖基化修饰蛋白，需分别测定总糖含量、糖型分布、唾液酸含量，明确糖链连接位点及各位点糖型组成，N-糖糖型异质性比例变异系数需控制在10%以内。

2.高级结构：采用圆二色谱、傅里叶变换红外光谱分析二级结构组成，采用核磁共振、冷冻电镜（分子量大于50kDa蛋白）明确三级结构，采用尺寸排阻色谱-多角度光散射分析聚合状态，确认天然寡聚体结构是否与目标结构一致。

3.理化性质：测定等电点、消光系数、电荷异质性、溶解度、稳定性，明确所有杂质相关理化特征，电荷异质性主峰比例不得低于90%（生产工艺稳定后）。

（二）生产原材料控制

1.表达载体/起始材料：重组蛋白表达载体