核酸的研究方法.pptVIP

核酸的研究方法;（优选）核酸的研究方法;DNP可用水饱和的酚抽提，去除蛋白质。还可用氯仿异戊醇去除蛋白质。

水相中的DNA可被0.3MNaAC-70%乙醇沉淀。

;★用0.14mol/LNaCl使DNP沉淀，上清中即为RNA核蛋白（RNP）。盐酸胍、苯酚等去蛋白。

★异硫氰酸胍/苯酚/氯仿法

★异硫氰酸胍/氯化铯密度梯度离心法

蛋白质：＜1.33g/ml

DNA：1.71g/ml左右

RNA：＞1.89g/ml

★mRNA的制备：

oligo(dT)纤维素（琼脂糖凝胶）亲合层析法

;（三）核酸含量的测定方法;②核糖和脱氧核糖的测定

RNA中核糖的测定用苔黑酚（3，5-二羟甲苯）法，利用RNA与浓盐酸和3，5-二羟甲苯作用生成绿色物质，在670nm比色测得光吸收值。再从标准曲线中查得对应的RNA的含量。

DNA中脱氧核糖的测定用二苯胺法，利用DNA在酸性条件下（冰醋酸和少量浓硫酸）与二苯胺作用生成蓝色化合物，在595nm比色测得光吸收值。再从标准曲线中查得对应的DNA的含量。;③紫外吸收的测定实验室中最常用的是首先测定样品在260nm和280nm的光吸收值（A值），从A260／A280的比值可判断样品的纯度。纯DNA的A260/A280应为1.8，纯RNA应为2.0。样品中如含有杂蛋白及苯酚，A260/A280比值即明显降低。不纯的样品不能用紫外吸收法作定量测定。